難治性リンパ腫の免疫回避機構の解明と新しい治療法の開発

2022 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 21H02701
• 配分区分: 補助金
• 研究機関: 新潟大学
• 研究代表者: 高田 尚良 新潟大学, 医歯学系, 助教 (90580259)
• 研究分担者: 奥田 修二郎 新潟大学, 医歯学系, 教授 (00512310) ; 近藤 英作 新潟大学, 医歯学系, 教授 (30252951) ; 齋藤 憲 新潟医療福祉大学, 医療技術学部, 教授 (70426584)
• 研究期間 (年度): 2021-04-01 – 2025-03-31
• キーワード: リンパ腫 / 宿主免疫細胞

研究実績の概要

今年度は前年度に引き続きRNAシークエンスより得られた情報から宿主免疫細胞へ影響を及ぼす可能性のある、有望な遺伝子を抽出し、この遺伝子に着目した以下のような機能解析を行った。
（1）in vitroにおける解析：細胞傷害性T細胞とMHC class I分子のノックアウト細胞株との共培養実験を行い、細胞傷害性T細胞の表現型の変化（特にexhaustion marker)に着目した解析を行った。次に着目している分子の阻害薬を投与し、同様の共培養実験を行い、非投与群と比較して細胞傷害性T細胞の表現型の変化を解析した。興味深いことに、阻害薬投与ではexhaustionからの回復がみられ、MHC分子低下により着目分子を介した宿主免疫環境における影響が示唆された。
（2）患者検体におけるvalidation：次に前年度で収集した患者検体（ホルマリン固定パラフィン包埋検体：N=90例程度）を用いてtissue microarrayを作成し、着目分子とMHC class I分子の免疫組織化学的検索を行い、これらの分子の発現に排他的関係にあることが証明された。また、蛍光多重染色を用い、着目分子の発現がある症例において宿主免疫細胞（特にexhaustion markerを有する細胞傷害性T細胞)が多く存在することがわかり、in vitroの実験結果を支持する結果と考えられた。
（3）マウス由来Bリンパ腫細胞株において同様にMHC class IをCRISPR-Cas9システムを用いてノックアウトを行い、ヒト由来細胞株と同様に着目分子が上昇することをRNAおよびタンパクレベルで見いだした。

現在までの達成度 (区分)

2: おおむね順調に進展している

理由

in vitroの実験、患者組織の実験を行い着目分子のvalidation解析を行うことができ、またマウス由来細胞株でも同様の結果が得られ、着目分子がさらに有望であることを確認することができた。おおむね順調に進展していると考えられる。

今後の研究の推進方策

今年度はノックアウトした細胞株をマウスに移植し、腫瘍増殖能や宿主免疫環境の変化を解析する。また、in vitroと同様に抗体医薬での治療実験を行い、宿主免疫環境の変化についてsingle cell RNAseqを行い解析する。また、着目分子とMHC class Iとの関連についての分子生物学的な解析をすすめることを予定している。

研究成果

• [国際共同研究] British Columbia Cancer Research(カナダ)
  • 国名: カナダ
  • 外国機関名: British Columbia Cancer Research
• [雑誌論文] Combinatorial treatment rescues tumour-microenvironment-mediated attenuation of MALT1 inhibitors in B-cell lymphomas (2023)
  • 著者名/発表者名: Shah SB, Carlson CR, Lai K, Zhong Z, Marsico G, Lee KM, Felix Velez NE, Abeles EB, Allam M, Hu T, Walter LD, Martin KE, Gandhi K, Butler SD, Puri R, McCleary-Wheeler AL, Tam W, Elemento O, Takata K, Steidl C, Scott DW, Fontan L, Ueno H, Cosgrove BD, Inghirami G, Garcia AJ, Coskun AF, Koff JL, Melnick A, Singh A.
  • 雑誌名: Nat. Meterials 巻: 22 ページ: 511-523
  • DOI: 10.1038/s41563-023-01495-3
  • 査読あり / 国際共著
• [雑誌論文] Single-cell spatial analysis of tumor immune architecture in diffuse large B-cell lymphoma (2022)
  • 著者名/発表者名: Colombo AR, Hav M, Singh M, Xu A, Gamboa A, Lemos T, Gerdtsson E, Chen D, Houldsworth J, Shaknovich R, Aoki T, Chong L, Takata K, Chavez EA, Steidl C, Hicks J, Kuhn P, Siddiqi I, Merchant A.
  • 雑誌名: Blood Advances 巻: 23 ページ: 4675-4690
  • DOI: 10.1182/bloodadvances.2022007493.
  • 査読あり / 国際共著
• [雑誌論文] Unmasking the suppressed immunopeptidome of EZH2 mutated diffuse large B-cell lymphomas with combination drug treatment. (2022)
  • 著者名/発表者名: Bourne CM, Mun SS, Dao T, Aretz ZEH, Molvi Z, Gejman RS, Daman A, Takata K, Steidl C, Klatt MG, Scheinberg DA.
  • 雑誌名: Blood Advances 巻: 26 ページ: 4107-4121
  • DOI: 10.1182/bloodadvances.2021006069.
  • 査読あり / 国際共著
• [雑誌論文] Tumor-associated antigen PRAME exhibits dualistic functions that are targetable in diffuse large B cell lymphoma. (2022)
  • 著者名/発表者名: Takata K, Steidl C et al. (著者36人中1番目）
  • 雑誌名: Journal of Clinical Investigation 巻: 132 ページ: e145343
  • DOI: 10.1172/JCI145343.
  • 査読あり
• [雑誌論文] Targeting refractory mantle cell lymphoma for imaging and therapy using C-X-C chemokine receptor type 4 radioligands. (2022)
  • 著者名/発表者名: Kwon D, Takata K, Zhang Z, Chong L, Fraser B, Zeisler J, Miyata-Takata T, Merkens H, Rousseau J, Aoki T, Kuo HT, Tan R, Zhang C, Lau J, Villa D, Uribe CF, Lin KS, Steidl C, Benard F.
  • 雑誌名: Clinical Cancer Research 巻: 28 ページ: 1628-1639
  • DOI: 10.1158/1078-0432.CCR-21-3284.
  • 査読あり
• [学会発表] Integrated Single Cell Analysis Reveals Co-Evolution of Malignant B Cells and the Tumor Microenvironment in Transformed Follicular Lymphoma (2022)
  • 著者名/発表者名: Clementine Sarkozy, Shaocheng Wu, Katsuyoshi Takata, Tomohiro Aoki, Susana Ben-Neria, Katy Milne, Brad H Nelson, Andrew P. Weng, David W. Scott, Jeffrey W. Craig*, Christian Steidl, Andrew Roth
  • 学会等名: 64th ASH Annual meeting and exposition
  • 国際学会
• [学会発表] WHO分類におけるDLBCLと類縁疾患の病理診断 (2022)
  • 著者名/発表者名: 高田尚良
  • 学会等名: 第61回日本臨床細胞学会秋季大会
  • 招待講演
• [学会発表] The role of pathogenesis and prognostic significance of LMP1 gene in MTX-associated lymphoproliferative disorders (2022)
  • 著者名/発表者名: Katsuyoshi Takata, Ayaka Mitsui, Hidekazu Iioka, Eisaku Kondo
  • 学会等名: 第81回日本癌学会総会
• [学会発表] MTX関連リンパ増殖疾患/リンパ腫でのLMP1遺伝子の病態形成における役割と予後予測の検討 (2022)
  • 著者名/発表者名: 高田尚良、飯岡英和、近藤英作
  • 学会等名: 第26回がん分子標的治療学会
• [学会発表] リンパ腫におけるゲノム解析の病理学的診断・研究への応用 (2022)
  • 著者名/発表者名: 高田尚良
  • 学会等名: 第111回日本病理学会総会
  • 招待講演
• [学会発表] DLBCLの分類と治療戦略 (2022)
  • 著者名/発表者名: 高田尚良
  • 学会等名: 富山リンパ腫の会
  • 招待講演