| 研究分担者 |
田島 吾郎 長崎大学, 病院(医学系), 准教授 (00437427)
上村 恵理 長崎大学, 病院(医学系), 助教 (20850647)
村瀬 壮彦 長崎大学, 医歯薬学総合研究科(医学系), 助教 (40823315)
池松 和哉 長崎大学, 医歯薬学総合研究科(医学系), 教授 (80332857)
村橋 志門 長崎大学, 病院(医学系), 医員 (40911532)
|
|---|
| 研究実績の概要 |
2023年度はマウスの頭部外傷（TBI）モデルの損傷脳におけるRNAシーケンス解析をもとにマクロファージ(Mφ)とミクログリア(Mi)の活性化マーカー（Aif1, Tmem119, P2ry12, Cx3cr1,Trem2, Trem1, Ccl3）をターゲットにRT-PCRを行った。また, 損傷脳から細胞を分離してフローサイトメーター（FACS）を行った。
PCRではMiのマーカー（Aif1, Tmem119, P2ry12）と神経再生阻害因子Rgmaがday1に低下してday7に上昇するという同様の変化を示した。FACSではMφ(CD11b+, CD45 high), Mi(CD11b+, CD45 intermediate)ともにday1, day7で増加を示したが, day7にはCD11b陽性細胞のうちMφが占める割合は減少し, Miが占める割合が増加していた。mRNA, 蛋白発現パターンからday1ではMφが活性化し, RGMaとMiの活性化は低下しているが, day7ではRGMaを発現したMiが増加して神経再生阻害にはたらく可能性が示唆された。
|
| 今後の研究の推進方策 |
今年度は, FACSでの評価をさらに進めてMφとMiの活性化マーカーとRGMaとの多重染色を行い（細胞マーカー：CD45, CD11b、活性化マーカー：Iba1, Tmem119, Cx3cr1, Trem2）, 損傷脳におけるMφ, Miの経時的な活性化とフェノタイプの変化, RGMaとの関連を明らかにする。
さらにマグネティックビーズあるいはフローサイトメーターによるソーティングで, 損傷脳からのMφ（CD45 high CD11b+）, Mi（CD45low CD11b＋）を分離して, より詳細なフェノタイプの解析を進めていく予定である。
また, 脳組織の免疫染色でMφ、Miを中心とした各細胞マーカー（Iba1, GFAP, NeuN, Claudin5, neurofilament）と, MφとMiの活性化マーカー（Ccr2, Iba1, Tmem119, Cx3cr1, Trem2など）とRGMaの多重染色を行い, 損傷脳におけるMφ, Miの集積とターゲット蛋白の発現分布を観察して, TBI後の損傷脳におけるMφ, Miの経時的な動態とRGMa発現との関連を明らかにする。
|
