| 研究課題/領域番号 |
21H03052
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 研究機関 | 岐阜大学 |
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研究代表者 |
河村 真吾 岐阜大学, 大学院医学系研究科, 助教 (30456511)
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| 研究分担者 |
平川 明弘 岐阜大学, 医学部附属病院, 助教 (50422720)
秋山 治彦 岐阜大学, 大学院医学系研究科, 教授 (60402830)
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| 研究期間 (年度) |
2021-04-01 – 2025-03-31
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| キーワード | 腱損傷 / PI3K/Aktシグナル / 再生医療 |
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| 研究実績の概要 |
①腱再生におけるPI3K/Aktシグナルのin vivo機能解析の追加
Scx-CreERT2/Ptenflox/flox (gain of function)マウス、Scx-CreERT2/Rosa26-loxP-stop-loxP-Pten (loss of function)マウスにタモキシフェンを投与後、腱断裂モデルを作製した。腱損傷1ヶ月後の再生腱を組織学的に解析し、PI3K/Aktシグナル活性化による腱再生促進効果（intrinsic healingの改善）を確認した。その際にScx陽性細胞以外の細胞群による腱再生（extrinsic healing）も多数見られることが明らかとなった。そのため、Tppp3-CreERT2/Ptenflox/flox (gain of function)マウス、Tppp3-CreERT2/Rosa26-loxP-stop-loxP-Pten (loss offunction)マウスを作製した。
②PI3K/Aktシグナルの上流制御機構の解析
RNAシークエンス解析でみられたPI3K/Aktシグナルの上流制御機構として細胞外マトリックス構成タンパクの変化に着目した。若齢マウス腱損傷時に高発現する遺伝子としてTnc,Thbs2を同定した。Tnc-HA、Thbs2-HAをクローニングしてpCAGベクターを作製し、HAタグ付きタンパクを合成、精製した。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
in vivoにおいて、PI3K/Aktシグナルが腱再生に正に関与していることが証明できたため、本シグナルの上流制御機構について、候補遺伝子がpick-upし、解析に着手できたため。
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| 今後の研究の推進方策 |
①腱再生におけるPI3K/Aktシグナルのin vivo機能解析
作製したTppp3-CreERT2/Ptenflox/flox (gain of function)マウス、Tppp3-CreERT2/Rosa26-loxP-stop-loxP-Pten (loss offunction)マウスにおいて、Scx-CreERT2マウスと同様の実験（組織解析、再生腱からRNA、タンパクを抽出し、realtime PCR法、Western blot法(腱マーカー：Scx, Mkx, Tnmd,Dcn等、瘢痕マーカー：αSMA、Myh11, Tagln等)を用いて分子レベルでの腱再生効果を評価する。また、電子顕微鏡解析(コラーゲン径、配向性)、組織強度試験を行う。
②PI3K/Aktシグナルの上流制御機構の解析
候補タンパク質を腱細胞に添加し、PI3K/Aktシグナル活性化を誘導できるものを同定する。さらに、マイクロRNAシークエンスを行い、若齢マウス特異的（または高齢マウス特異的）miRNAを同定する。
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