| 研究課題/領域番号 |
21H03119
|
|---|
| 配分区分 | 補助金 |
|---|
| 研究機関 | 岡山大学 |
|---|
研究代表者 |
山本 直史 岡山大学, 医歯薬学域, 准教授 (50432662)
|
|---|
| 研究分担者 |
井手口 英隆 岡山大学, 医歯薬学域, 助教 (80779421)
宮地 孝明 岡山大学, 自然生命科学研究支援センター, 研究教授 (40550314)
江口 傑徳 岡山大学, 医歯薬学域, 講師 (20457229)
江國 大輔 岡山大学, 医歯薬学域, 准教授 (70346443)
高柴 正悟 岡山大学, 医歯薬学域, 教授 (50226768)
|
|---|
| 研究期間 (年度) |
2021-04-01 – 2025-03-31
|
| キーワード | 細胞外小胞 / 侵襲性歯周炎 / マイクロRNA / プロテオーム |
|---|
| 研究実績の概要 |
侵襲性歯周炎（Aggressive periodontitis：AgP）は全身的には健康な若年者に発症し，急速に進行する特殊な歯周炎であるが、その発症病態は不明なままである。本研究では，臓器特異的な作用（臓器トロピズム）が近年注目されている血中の細胞外小胞（EV）とAgPの病態関与の可能性を調べた。
今年度は、AgP患者6名と健常者3名の初診時血中EVから，AgPで高発現するmiRNAをRNAシーケンスにて調べ，マーカー候補となるそれらのmiRNA mimicをヒト歯肉線維芽細胞と歯周炎モデルマウスに遺伝子導入した。誘導された炎症性サイトカインの発現量をリアルタイムPCR法とELISA法にて測定し，歯槽骨吸収量をマイクロCTにて調べた。
健常者と比較して，AgP患者で発現量が2倍以上増加したmiRNAを500種類以上同定した。それらのうち5種のmiRNAとmiR-181b-5pを歯肉線維芽細胞に導入すると，IL-6とIL-1βの産生が増加した。とりわけ，miR-181b-5p を歯肉組織に導入すると歯槽骨吸収が進行した。
すなわち、AgP患者の血中EVには診断マーカー候補となるmiRNAが多く発現しており，miR-181b-5pはIL-6とIL-1β発現を伴う炎症を助長することによってAgPを重症化する可能性が示された。
|
| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
当初，尾静脈からのEV注入を予定していたが、よりダイレクトな効果を期待して歯肉組織への注入法を採用した。
また，EV蛋白への血清蛋白の混入を極力減らすために、EV精製方法やプロテオーム解析の前処理に関して，様々な条件を試したため時間を要した。
|
| 今後の研究の推進方策 |
今後も引き続き，バイオマーカー候補のmiRNAsを歯周病モデルマウスの歯肉組織に注入し，骨吸収状態と歯周組織中のmRNA・蛋白質の発現変動を調べる。また，In silico解析によって，マーカー候補miRNAsのターゲット遺伝子群を抽出し，炎症制御メカニズムを調べる。
また，血清蛋白の除去効率をさらに向上すべくプロテオーム解析の条件設定をさらに行い，AgP患者のEV関連蛋白の網羅的解析を行う。
|
