| 研究課題/領域番号 |
22H02363
|
|---|
| 配分区分 | 補助金 |
|---|
| 研究機関 | 明治大学 |
|---|
研究代表者 |
新屋 良治 明治大学, 農学部, 専任准教授 (30802798)
|
|---|
| 研究分担者 |
佐藤 一輝 国立研究開発法人理化学研究所, 環境資源科学研究センター, 基礎科学特別研究員 (90842071)
|
|---|
| 研究期間 (年度) |
2022-04-01 – 2025-03-31
|
| キーワード | サツマイモネコブセンチュウ / VIGS / tra-1 |
|---|
| 研究実績の概要 |
今年度はサツマイモネコブセンチュウの性決定を制御する分子機構を解明することを目的として、ウイルス誘導性ジーンサイレンシング（VIGS）を利用したサツマイモネコブセンチュウのtra-1ホモログ機能解析を行った。VIGS実験では、TRV RNA２ベクターにサツマイモネコブセンチュウのtra-1ホモログ配列断片304bpと575bp をそれぞれ挿入し、2種類のベクターを作製した。このTRVプラスミドを用いて形質転換したアグロバクテリウムをベンサミアナタバコの葉に感染させ、感染から10日後に線虫を1500頭ずつポットに接種した。線虫接種から10日後に、根に形成されたゴールを切り出し1.5 mLチューブに回収し、破砕した後RNAを抽出した。抽出したRNAからcDNAを合成し、tra-1ホモログの発現量を調査した。tra-1ホモログの発現量を比較するため、ハウスキーピング遺伝子としてタンパク質ジスルフィドイソメラーゼ（Disu）遺伝子を用いた。また、線虫接種から6週間後に、植物の根を水で洗って土を落とし、根の外部に露出したサツマイモネコブセンチュウの卵嚢を回収した。実体顕微鏡下で卵嚢を解剖し、卵嚢内の卵の数を計測し、雌1個体当たりの産卵数を計測した。実験の結果VIGSによるtra-1ホモログの発現抑制を試みた処理区において、産卵数を含め線虫の表現型の変化はほとんど観察されなかった。また、対照区と比較してtra-1遺伝子発現量の抑制も見られなかった。tra-1ホモログの発現抑制が見られなかった理由としては、線虫が目的遺伝子のRNAを植物から十分に取り込めていないことや、発現抑制は生じているものの性決定のタイミングとずれていることなどが考えられる。
|
| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
今年度にサツマイモネコブセンチュウtra-1遺伝子の機能解析が終了する見込みであったが、実験を実施した結果これまでに明確な結果を得ることができていない。このことは、標的とするtra-1ホモログが想定した機能を有していない可能性もあるが、ネコブセンチュウが十分にdsRNAを体の中に取り込めていない可能性も残されている。このような可能性や、ベンサミアナタバコがdsRNAを発現するタイミングの精査なども1つずつ確認をする必要が生じたため、進捗がやや遅れている。
|
| 今後の研究の推進方策 |
リアルタイムPCRにより、tra-1遺伝子発現量と、線虫体内へのdsRNA取り込み量を精査できる技術は確立した。今後はこの技術を用いて、これまでに表現型が得られていない原因を調べる。また、tra-1だけでなく、性決定に関与する可能性のある他の遺伝子についてもVIGSによる機能解析を実施する。
|
