相同組換えは、重篤なDNA損傷である二重鎖切断を正確に修復する機構として働く。それゆえ、ゲノムの安定性を維持する重要な遺伝的メカニズムの一端を担い、発ガン抑止機構としても機能する。相同組換え (修復) は、大きく3 つの反応ステップ(初・中・後期) に分かれるが、本申請研究では、分裂酵母を主要な生物モデル系として、申請代表者らによって独自に発見された因子(Nip1/Ctp1、Swi5-Sfr1 複合体、 Fbh1 ヘリケースなど) を中心に、各ステップを再構成し、これらの因子がそれぞれの反応過程にどのように関与するのか、分子レベルで解明することを目指した。当該年度は、以下の成果を得た。 Swi5-Sfr1ヘテロ2量体によるRad51の活性化機構---リアルタイムアッセイ系を構築して、Swi5-Sfr1によるRad51依存的鎖交換反応を解析するアッセイ系を2種類構築した。 Rad55-Raad57ヘテロ2量体によるRad51の活性化機構---昨年度までに構築したRad55-Rad57ヘテロ二量体の発現精製系を改良して、多量精製を可能とした。Rad55-Rad57ヘテロ二量体によるRad51の鎖交換反応の効果について、予備的ではあるが、一定の促進機構を検出することに成功した。 ヒトRad51活性化機構の解析---ヒトBRCA2とヒトSwi5-Sfr1との機能の比較解析を行うために、ヒト由来のhRad51、hRPA、hSwi5-Sfr1の高発現・精製系を確立した。また、これらの精製したタンパク質を用いて、hSwi5-Sfr1によるhRad51依存的DNA鎖交換の促進反応を試験管内で再構成することに成功した。
|