これ迄の研究の総力を結集させたアミロイドーシスの早期診断・病態解析システムの開発

2013 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 24249036
• 研究機関: 熊本大学
• 研究代表者: 安東 由喜雄 熊本大学, 生命科学研究部, 教授 (20253742)
• 研究分担者: 大林 光念 熊本大学, 生命科学研究部, 教授 (90361899) ; 山下 賢 熊本大学, 生命科学研究部, 講師 (20457592) ; 植田 光晴 熊本大学, 医学部附属病院, 講師 (60452885) ; 城野 博史 熊本大学, 医学部附属病院, 准教授 (40515483) ; 神力 悟 熊本大学, 医学部附属病院, その他 (00583048) ; 田崎 雅義 熊本大学, 生命科学研究部, 助教 (50613402)
• 研究期間 (年度): 2012-04-01 – 2015-03-31
• キーワード: アミロイドーシス / マススペクトロメトリー / トランスサイレチン / ポリニューロパチー家族性アミロイド / ALアミロイドーシス / 遺伝子変異 / レーザーマイクロダイセクション / アミロイド原因蛋白質

研究概要

新たな迅速にして確実なアミロイドーシス診断法を確立して、これまで同定できなかったアミロイドーシスの病態と診断を確立するため、以下の研究を行った。
①レーザーマイクロ・ダイセクションとLC/ MS MSを組み合わせた方法でアミロイド原因蛋白質を同定できるか検証するために、すでに診断がついている各種アミロイドーシス（AL、AA、SSA、FAP、DRA)患者のホルマリン固定組織（心臓、神経など）を解析した。その結果、免疫組織染色で同定できなかったALアミロイドーシス標本で、本法が有効であるとともに、本解析法と臨床診断の一致率は97％と非常に高い一致率を示した。解析結果から、本法は、様々なタイプのアミロイドーシス患者からアミロイド原因蛋白質を同定できることが明らかとなった。さらに、解析に用いたアミロイド沈着組織は、心臓、神経、舌など様々であったが、いずれの臓器からでもアミロイド原因蛋白質の検出は可能であった。
②組織沈着アミロイドの抽出液にプロテイナーゼKを入れると、アミロイドの収率が大きく向上することを発見した。
③膝組織に沈着したアミロイドの約60％がTTRであることが判明したが、40％は現在のところ原因不明で、現在なお上記方法で検討中である。
④熊本県との共同作業で、「アミロイドーシス診断構築事業」を立ち上げ、アミロイド診断センターで全国各地から送られてくるアミロイドーシスの検体を診断したところ、FAP患者サンプルの解析において、世界初の遺伝子変異1例、国内初の遺伝子変異4例が明らかになった。

現在までの達成度 (区分)

2: おおむね順調に進展している

理由

レーザーマイクロ・ダイセクションとLC-MS/MSを用いた解析法にプロテイナーゼK抽出液を組み合わせた方法がアミロイド原因蛋白質の同定法として有用であることがほぼ証明できた。今後はさらにLC-MS/MSの解析技術の向上を図るとともに、解析ソフトの充実を図る。またさらに依頼が多数来ている未知のアミロイドーシス解析を行い、診断をつける作業が、確実に進行している。

今後の研究の推進方策

これまでの結果を、国内の検査医学、神経関係の学会で発表する。また上記のように今後はさらにLC-MS/MSの解析技術の向上を図るとともに、解析ソフトの充実を図り3年目のプロジェクトに備える。

研究成果

• [雑誌論文] Fibroblasts endocytose and degrade transthyretin aggregates in transthyretin-related amyloidosis. (2013)
  • 著者名/発表者名: Misumi Y, Ando Y, Gonçalves NP, Saraiva MJ.
  • 雑誌名: Lab Invest 巻: 93 ページ: 911-920
  • 査読あり
• [雑誌論文] Dominant cardiac type of familial amyloidotic polyneuropathy associated with a novel transthyretin variant Thr59Arg. (2013)
  • 著者名/発表者名: Obayashi K, Misumi Y, Watanabe T, Ando T, Akagami T, Tasaki M, Shinriki S, Ueda M, Yamashita T, Hirotani S, Ando Y.
  • 雑誌名: Muscle Nerve 巻: 48 ページ: 839-841
  • 査読あり
• [雑誌論文] Changes in pathological and biochemical findings of systemic tissue sites in familial amyloid polyneuropathy more than 10 years after liver transplantation. (2013)
  • 著者名/発表者名: Oshima T, Kawahara S, Ueda M, Kawakami Y, Tanaka R, Okazaki T, Misumi Y, Obayashi K, Yamashita T, Ohya Y, Ihse E, Shinriki S, Tasaki M, Jono H, Asonuma K, Inomata Y, Westermark P, Ando Y.
  • 雑誌名: J Neurol Neurosurg Psychiatry 巻: - ページ: -
  • DOI: doi:10.1136/jnnp-2013-305973 [Epub ahead of print]
• [雑誌論文] Marked cardiomegaly in a patient with familial amyloidotic polyneuropathy after orthotopic liver transplantation: a case study. (2013)
  • 著者名/発表者名: Sakashita N, Kagawa S, Date R, Ueno T, Nakagawa T, Yamashita T, Obayashi K, Ohshima T, Ueda M, Horiguchi H, Ando Y, Takeya M.
  • 雑誌名: Pathol Int 巻: 6 ページ: 260-265
  • 査読あり
• [雑誌論文] Effect of age and sex differences on wild-type transthyretin amyloid formation in familial amyloidotic polyneuropathy: A proteomic approach. (2013)
  • 著者名/発表者名: Tasaki M, Ueda M, Obayashi K, Koike H, Kitagawa K, Ogi Y, Jono H, Su Y, Suenaga G, Oshima T, Misumi Y, Yoshida M, Yamashita T, Sobue G, Ando Y.
  • 雑誌名: Int J Cardiol 巻: 170 ページ: 69-74
  • 査読あり
• [雑誌論文] Effect of albumin on transthyretin and amyloidogenic transthyretin Val30Met disposition and tissue deposition in familial amyloidotic polyneuropathy. (2013)
  • 著者名/発表者名: Taguchi K, Jono H, Kugimiya-Taguchi T, Nagao S, Su Y, Yamasaki K, Mizuguchi M, Maruyama T, Ando Y, Otagiri M.
  • 雑誌名: Life Sci 巻: 93 ページ: 1017-1022
  • 査読あり
• [雑誌論文] Usefulness of plasma B-type natriuretic peptide as a prognostic marker of cardiac function in senile systemic amyloidosis and in familial amyloidotic polyneuropathy. (2013)
  • 著者名/発表者名: Usuku H, Obayashi K, Shono M, Oshima T, Tasaki M, Yasuda H, Ogawa H, Ando Y.
  • 雑誌名: Amyloid 巻: 20 ページ: 251-255
  • 査読あり
• [雑誌論文] Lower Framingham risk score and the absence of hypertension are associated with the morning peak in the circadian variation of ST-elevation myocardial infarction onset. (2013)
  • 著者名/発表者名: Usuku H, Izumiya Y, Sugiyama S, Kojima S, Araki S, Kurogi K, Yamamoto N, Ando Y, Ogawa H.
  • 雑誌名: Hypertens Res 巻: - ページ: -
  • DOI: doi:10.1038/hr.2013.139. [Epub ahead of print]
• [雑誌論文] Guideline of transthyretin-related hereditary amyloidosis for clinicians. (2013)
  • 著者名/発表者名: Ando Y, Coelho T, Berk JL, Cruz MW, Ericzon BG, Ikeda S, Lewis WD, Obici L, Plante-Bordeneuve P, Rapezzi C, Said Salvi F
  • 雑誌名: Orphanet J Rare Dis 巻: 1186 ページ: 1750-1172
  • 査読あり
• [雑誌論文] 家族性アミロイドポリニューロパチーと自律神経障害. (2013)
  • 著者名/発表者名: 安東由喜雄
  • 雑誌名: 自律神経 巻: 50 ページ: 109-111
  • 査読あり
• [雑誌論文] 家族性アミロイドポリニューロパチー（FAP）と自律神経障害 (2013)
  • 著者名/発表者名: 安東由喜雄, 山下太郎, 大林光念
  • 雑誌名: Peripheral Nerve 巻: 24 ページ: 31-36
  • 査読あり
• [雑誌論文] アミロイドーシスの研究展開と臨床医学への還元 (2013)
  • 著者名/発表者名: 中村 正, 安東由喜雄
  • 雑誌名: 臨床リウマチ 巻: 25 ページ: 81-83
  • 査読あり
• [雑誌論文] 神経疾患ノート：家族性アミロイドポリニューロパチー (2013)
  • 著者名/発表者名: 安東由喜雄
  • 雑誌名: Clinical Neuroscience 巻: 32 ページ: 1098-1100
  • 査読あり
• [雑誌論文] アミロイドーシスと活性酸素傷害 (2013)
  • 著者名/発表者名: 安東由喜雄
  • 雑誌名: 医学のあゆみ 巻: 247 ページ: 846-850
  • 査読あり
• [雑誌論文] 生殖細胞系遺伝子検査(遺伝学的検査) (2013)
  • 著者名/発表者名: 大林光念, 安東由喜雄
  • 雑誌名: 臨床検査 巻: 57 ページ: 738-743
  • 査読あり
• [図書] 先天性代謝異常ハンドブック (2013)
  • 著者名/発表者名: 安東由喜雄
  • 総ページ数: 456
  • 出版者: 中山書店
• [図書] Human Serum Albumin (2013)
  • 著者名/発表者名: Jono H, Ando Y
  • 総ページ数: 510
  • 出版者: 崇城大学出版センター
• [図書] The proceedings of the XIIIth International Symposium on Amyloidosis, May6-10, 2012 (2013)
  • 著者名/発表者名: Ihse E, Rapezzi C, Merlini G, Benson MD, Ando Y, Suhr OB, Leone O, Lorenzini M, Quarta CC, Obici L, Lavatelli F, Liepnieks J,Ohshima T, Jono H, Westermark P, Ikeda S-I, Tasaki M, Ueda M
  • 総ページ数: 496
  • 出版者: GUARD (Groningen unit for Amyloidosisi Reserch & Development)
• [産業財産権] 抗トランスサイレチンヒト化抗体 (2014)
  • 発明者名: 安東由喜雄 外
  • 権利者名: 安東由喜雄 外
  • 産業財産権種類: 特許
  • 産業財産権番号: 特願2014-014911
  • 出願年月日: 2014-01-29