| 研究課題/領域番号 |
24249082
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| 研究種目 |
基盤研究(A)
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| 研究機関 | 京都大学 |
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研究代表者 |
吉村 長久 京都大学, 医学(系)研究科(研究院), 教授 (70211662)
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| 研究分担者 |
池田 華子 京都大学, 医学(系)研究科(研究院), 助教 (20372162)
垣塚 彰 京都大学, 生命科学研究科, 教授 (80204329)
今村 博臣 京都大学, 学内共同利用施設等, 准教授 (20422545)
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| 研究期間 (年度) |
2012-10-31 – 2015-03-31
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| キーワード | 神経保護 / 眼難治疾患 |
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| 研究概要 |
１）実験動物における網膜リアルタイムイメージング法の確立
動物に薬剤投与を行いその効果判定をするにあたって、同一個体で神経節細胞・神経線維層、視細胞の変性状況をリアルタイムで継続的に撮影することで効率的かつ客観的な評価が可能になる。今までに、複数色の蛍光撮影も同時に可能な動物用最新型OCT（Multiline OCT）を用い、Thy1-CFPマウスにNMDAを硝子体内投与した際の神経節細胞障害を、CFP撮影による神経節細胞数、OCT撮影による神経節細胞・網膜神経線維層厚の両面から経時的に評価できることを確認した。また、網膜色素変性症モデルマウスおよびウサギにて、視細胞層あるいは、視機能に関係するとされる外節・内節の接合部の形態変化に関して経時変化を評価する系を確立した。画像取得後に、実際に眼球摘出後、組織像と、蛍光眼底画像および光干渉断層計での網膜描写像とを比較し、今までの組織学的な評価と同等以上の評価が蛍光眼底撮影＋光干渉断層計でも可能であることを確認した。
２）NMDA傷害緑内障モデルマウスに対するVCP阻害剤の網膜神経節細胞消失抑制効果の検証
Thy1-CFPマウスに2nmol NMDAを硝子体注射し急性神経節細胞傷害を惹起する緑内障モデルマウスにおいて、VCP阻害剤により、網膜神経節細胞死が抑制されるか検証を行った。NMDA硝子体内投与前、１、４、７、１４日後にMultiline OCTを用いてCFP蛍光眼底撮影と網膜断層OCT同時撮影を行い、CFP画像を用い神経節細胞数を、OCT画像を用い網膜神経線維層厚を計測し、薬剤投与群とコントロール群での比較を行っいVCP阻害剤の効果を確認した。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
予定していた実験をほぼ遂行できており、結果がそろいつつある。
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| 今後の研究の推進方策 |
今後は、ＶＣＰ阻害剤の効果判定に関して、以下の動物モデルで検証予定である。
１）正常眼圧緑内障モデルマウスでのVCP阻害剤の網膜神経節細胞消失抑制効果の検討：グルタミン酸輸送体であるGLASTの欠損マウスでは、生後一年程度で網膜神経節細胞が変性脱落し、正常眼圧緑内障のモデルとして使用されている３）。このGLAST欠損マウスとThy1-CFPマウスを交配させて神経節細胞をCFPにて蛍光ラベルしたマウスを作成、生後１カ月齢よりVCP阻害剤を内服投与し、生後３、６、９、１２カ月齢にCFP蛍光眼底撮影により神経節細胞数を、OCT撮影にて網膜神経線維層厚をそれぞれ評価する。すでにマウスは使用できる状態になっており、薬剤投与は前年度より開始する。
２）網膜色素変性症モデルマウスrd12での阻害剤の視細胞消失抑制効果の検討：rd10より変性のゆっくりな網膜色素変性症モデルマウスであるrd12に、生後２カ月齢からVCP阻害剤を内服投与し、平成２４年度３）に準じて、生後６、８、１０、１２カ月齢にて視細胞の変性度合いを評価する。発症に１年近くかかるため、薬剤投与は前年度に開始する。
３）網膜色素変性症モデルウサギでのVCP阻害剤の視細胞消失抑制効果の検討：生後7ヶ月までに杆体細胞が消失する網膜色素変性症のモデルウサギ２）(網膜色素変性症ウサギ:ヒトの変異型ロドプシンを発現させたトランスジェニックウサギ)に対し、生後１カ月齢よりVCP阻害剤を内服投与し、生後２、３、４、５カ月齢でOCT撮影を行い視細胞層の厚み、視細胞外節・内節接合部の評価、網膜電図検査により視機能の評価を行う。発症まで数ヶ月かかるので薬物投与は前年度より開始する。
４）黄斑変性モデルマウスCCR2欠損マウスでの網膜変性抑制効果の検討
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