| 研究課題/領域番号 |
24300124
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| 研究種目 |
基盤研究(B)
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| 研究機関 | 公益財団法人大阪バイオサイエンス研究所 |
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研究代表者 |
榎本 和生 公益財団法人大阪バイオサイエンス研究所, 神経細胞生物学部門, 研究部長 (80300953)
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| 研究分担者 |
古泉 博之 公益財団法人大阪バイオサイエンス研究所, 神経細胞生物学部門, 研究員 (10334335)
金井 誠 公益財団法人大阪バイオサイエンス研究所, 神経細胞生物学部門, 研究員 (50598034)
金森 麗 (森川 麗) 公益財団法人大阪バイオサイエンス研究所, 神経細胞生物学部門, 研究員 (50534575)
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| 研究期間 (年度) |
2012-04-01 – 2015-03-31
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| キーワード | 感覚ニューロン / 樹上突起 / ショウジョウバエ / リン酸化シグナル / 受容領域 |
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| 研究概要 |
HpoキナーゼとNDR.キナーゼ・ファミリーとの相互作用について、生化学的手法および光学的手法をもちいて検討を行った。発生初期のショウジョウバエ胚からCo-IP実験を行うと、HpoキナーゼとTrcキナーゼとの複合体が、HpoキナーゼとWtsキナーゼの複合体よりも優位であるが、ショウジョウバエ3令幼虫の抽出液からCo-IPすると、その比率は逆転した。従って、HpoキナーゼとNRDキナーゼ・ファミリーとの複合体形成は発生の過程で変動する事が示唆された。現在、Split-GFP法をもちいて、HpoキナーゼとNRDキナーゼ・ファミリーとの複合体形成をリアルタイム追跡しようとしているが、解像度の問題があり、明確な結果がいまだ得られていない。今後、Split-GFP断片蛋白質の発現量の調節を模索するとともに、検出系である顕微鏡や光学系についても改善を行う予定である。
並行して、受容領域の維持に関わる因子群の網羅的同定の為に、ゲノムワイドRNAiスクリーンを開始した。具体的には、ppk-GAL4ドライバーを用いて、特定の遺伝子に対するノックダウンを行い、維持に特異的な異常を示す遺伝子群を同定する。これまでに、主として微小管の安定化に関わる因子群、リン酸化酵素群、細胞骨格制御因子群に着目し、スクリーニングを行い、すでに複数の候補因子群を同定している。今後もRNAiスクリーニングを継続するとともに、単離した因子群については、変異体を使って詳細な機能解析を予定している。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
生化学解析やスクリーニングは順調に進んでいる。ただsplit-GFPによる光学解析に関しては予定通り進行しておらず、更なる工夫が必要である。
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| 今後の研究の推進方策 |
split-GFPによる光学解析に関しては予定通り進行しておらず、光学系の研究者との共同研究も視野に入れた工夫が必要である。
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| 次年度の研究費の使用計画 |
異なる発現レベルでSplit-GFP断片蛋白質の発現量調節を行うために、複数の異なるベクターシステムを使った発現系の開発に取り組む。
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