| 研究課題/領域番号 |
24310055
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| 研究種目 |
基盤研究(B)
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| 研究機関 | 長岡技術科学大学 |
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研究代表者 |
解良 芳夫 長岡技術科学大学, 工学部, 教授 (00137168)
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| 研究分担者 |
高橋 祥司 長岡技術科学大学, 工学部, 准教授 (90324011)
阿部 勝正 長岡技術科学大学, 工学部, 助教 (40509551)
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| 研究期間 (年度) |
2012-04-01 – 2016-03-31
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| キーワード | 難分解性有害物 / 含塩素有機リン酸トリエステル / 微生物分解 / 分解酵素 / 酵素遺伝子 / 遺伝子発現調節 |
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| 研究概要 |
Tris (1,3-dichloro-2-propyl) phosphate(以下TDCPP)やtris (2-chloroethy1) phosphate(以下TCEP)などの塩素を含む有機リン酸トリエステル類は、難分解性で蓄積性もあり、種々の毒性を有する。我々が世界で初めて単離に成功した含塩素有機リン酸トリエステル類分解菌Sphingomonas sp. TDK1とSphingobium sp. TCM1に存在する初発分解酵素ホスポトリエステラーゼ(TDK-HAD及びTCM-HAD)の発現調節機構と分解経路下流酵素をタンパク質レベル、遺伝子レベルで詳細に解析し、分解経路全体を明らかにすることが本研究の目的である。平成24年度は以下の成果を上げた。
1.TDK-HAD及びTCM-HAD遺伝子の解析により、ペリプラズム間隙への移行シグナルと推定される配列が見いだされた。大腸菌を用いて、当該酵素遺伝子組換え体の局在性を解析した結果、当該酵素はサイトゾル画分とペリプラズム画分の両画分で検出された。今後、発現条件等を再検討し、更なる解析が必要と考えられる。
2.TCMI株のゲノムからHAD遺伝子の推定プロモーター領域を取得し、ルシフェラーゼ遺伝子をレポーター遺伝子として用いたHAD遺伝子のプロモーター解析用ベクターを作成した。
3.これまでの研究結果から、TDK-HAD及びTCM-HADはTDCPPやTCEPにより特異的に誘導合成されるのではなく、むしろ無機リン酸の枯渇により誘導される可能性が示唆された。そこで,他の細菌で明かにされているPhoレギュロン制御系遺伝子群の塩基配列情報をもとに、TCM1株のPhoレギュロン制御系遺伝子群の部分DNA断片を取得した。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
HADプロモーター解析用ベクターを構築できたこと、TCMI株のPhoレギュロン制御系遺伝子群の重要な部分DNA断片を取得できたこと、分解経路下流酵素の酵素活性測定法などについて情報収集を行ったこと。
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| 今後の研究の推進方策 |
前年度の研究実績をふまえ、新年度当初に提出する科学研究費助成事業交付申請書の「本年度の研究実施計画」
に記載する計画に従って、研究を推進する。
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| 次年度の研究費の使用計画 |
会計上、3月末までの支払いが済んでいない分、及び、H25年度交付予定の研究費がやや少ないため計画的に繰り越した分である。H25年度交付予定の研究費と合わせて、主に試薬類等の消耗品として使用する予定である。
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