| 研究課題/領域番号 |
24310149
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| 研究種目 |
基盤研究(B)
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| 研究機関 | 横浜市立大学 |
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研究代表者 |
足立 典隆 横浜市立大学, 生命ナノシステム科学研究科, 教授 (30264675)
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| 研究期間 (年度) |
2012-04-01 – 2015-03-31
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| キーワード | ゲノム改変 / ジーンターゲティング / ランダム挿入 |
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| 研究概要 |
本研究代表者は、動物細胞のゲノム改変に関わる応用ゲノム研究やゲノム損傷修復研究をさまざまな角度から行ってきた。本研究では、これまでの知見と技術を基盤として、あらゆるヒト細胞に適用可能な超高効率ジーンターゲティング法を開発することを目的とする。まず、エクソントラップ型のターゲティングベクター(蛍光タンパク質遺伝子マーカーを搭載)をエレクトロポレーション法によりNalm-6細胞に導入し、ソーティングによる組換え体の選別を行った。次に、このアッセイシステムを利用して、ターゲティングベクターにさまざまな工夫(負選択マーカーの付加や変性など)を施した後に実験を行った。また、以上の実験と並行して、alt-NHEJに関わる因子、特に相同組換えには影響を与えずalt-NHEJのみに特異的に関わる因子の探索を試みた。この候補遺伝子についてはノックアウトヒト細胞を作製し、組換え効率の変化を解析した。一方、ターゲティングベクターの導入時に種々のsiRNAや相同組換え因子発現ベクターをコトランスフェクションにより導入し、各挿入頻度とターゲティング効率への影響について調べた。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
交付申請書に記した研究目的に沿って、交付申請書に記した平成24年度の研究実施計画の内容をおおむね遂行できたため。
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| 今後の研究の推進方策 |
交付申請書に記した平成25年度の研究実施計画を遂行するべく研究を進める。
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| 次年度の研究費の使用計画 |
研究実施計画を遂行するために必要な消耗品の購入のために研究費を使用するが、その他の消耗品の購入や旅費、人件費にも使用する。特に昨年度購入を控えた合成核酸や幹細胞培養用の培地の購入が必要となる見込みである。
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