| 研究課題/領域番号 |
24380020
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| 研究種目 |
基盤研究(B)
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| 研究機関 | 名古屋大学 |
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研究代表者 |
森 仁志 名古屋大学, 生命農学研究科, 教授 (20220014)
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| 研究期間 (年度) |
2012-04-01 – 2015-03-31
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| キーワード | 翻訳後制御 / 脱リン酸化 / エチレン / ホスファターゼ / ACC合成酵素 |
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| 研究概要 |
エチレンは果実の成熟、野菜・花卉の鮮度保存など園芸作物に大きな影響を与える。エチレン生合成経路の鍵となるACC合成酵素は、リン酸化によって安定化され、脱リン酸化によって不安定化(分解)される。本研究では、ACC合成酵素のリン酸化・脱リン酸化を介した翻訳後制御機構を解析することによって、エチレン生成調節機構を明らかにする。ACC合成酵素の脱リン酸化に関わると推測されているProteinPhosphatase2A(PP2A)は、3つのサブユニットA、B、Cから成り、それぞれが複数の遺伝子群から構成され、構成サブユニットの組合せにより多種多様なPP2Aが存在する。これらサブユニットのうち、Bサブユニットが基質認識に関わっており、ACC合成酵素を脱リン酸するPP2Aの同定を試みた。シロイヌナズナには16種のBサブユニット遺伝子が存在する。エチレンを過剰生成するシロイヌナズナの突然変異体rcnlは、PP2Aの1つのAサブユニット(RNCl)を欠失している。PP2Aに特異的な阻害剤ミクロシスチン-LRをリガンドにしたアフィニティカラムを用いて、野生型と突然変異体rcnlからPP2Aをそれぞれ単離した。iTRAQ法により質量分析計を用いて、ACC合成酵素を認識するBサブユニットとしてB"タイプを候補として同定した。この選抜されたB"タイプとACC合成酵素の結合を、酵母のtwo-hybrid systemで検討したが、同定できなかった。再度、条件を変えて解析する必要がある。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
予定通り計画に従って研究は行っているが、単離されたPP2AのBサブユニットはtwo-hybrid systemでは予想通りの成果にならず、同定されていない。
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| 今後の研究の推進方策 |
two‐hybrid systemの条件を変えて、再度解析する。PP2Aをミクロシスチン-LRで単離したが、Aサブユニットの抗体を用いて、さらに単離を試み質量分析計で解析する。
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| 次年度の研究費の使用計画 |
two-hybridsystem、質量分析計の解析、BサブユニットのT-DNAタグラインの選抜およびRNAiによる機能の解析を行う。
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