研究課題
エチレン生合成経路の鍵となるACC合成酵素は、リン酸化によって安定化され、脱リン酸化によって不安定化（分解）される。本研究では、ACC合成酵素のリン酸化・脱リン酸化を介した翻訳後制御機構を解析することによって、エチレン生成調節機構を明らかにする。ACC合成酵素の脱リン酸化に関わると推測されているProtein Phosphatase 2A (PP2A)は、3つのサブユニットA、 B、 Cから成り、それぞれが複数の遺伝子群から構成され、構成サブユニットの組合せにより多種多様なPP2Aが存在する。エチレンを過剰生成するシロイヌナズナの突然変異体rcn1は、PP2Aの１つのAサブユニット(RNC1)を欠失している。これまでの研究から、野生型と突然変異体rcn1からPP2Aをそれぞれ単離した。Bサブユニットが基質認識に関わっており、ACC合成酵素を脱リン酸するPP2Aの同定を試みた結果、ACC合成酵素を認識するBサブユニットとしてB"タイプを候補として同定した。この選抜されたB"タイプとACC合成酵素の結合を、酵母のtwo-hybrid systemで検討したが、同定できなかった。この結果を基にトマトのゲノムデータベースから、シロイヌナズナのPP2A各サブユニットに類似するトマトのサブユニットを検索してcDNAを単離した。cDNAを鋳型にしてin vitro transcription/translationによって各サブユニットを合成した。同様にACC合成酵素SlACS2を合成した。in vitro translationの時にPP2AのサブユニットにはFLAG-tagを付け、SlACS2にはビオチンを付加した。これらを使い、2分子の結合を検出できるAlphaScreen法を用いて解析したが、著しい結合は検出できなかった。AサブユニットとCサブユニットは結合するが、Bサブユニットが結合するためにCサブユニットのC末端がメチル化される必要があるという報告がある。この点を考慮して解析しなくてはいけないが、次の機会に試みる。
26年度が最終年度であるため、記入しない。
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J. Exp. Bot.
巻: 65 ページ: 261-273
10.1093/jxb/ert371
