| 研究課題/領域番号 |
24380026
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| 研究機関 | 弘前大学 |
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研究代表者 |
佐野 輝男 弘前大学, 農学生命科学部, 教授 (30142699)
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| 研究分担者 |
原田 竹雄 弘前大学, 農学生命科学部, 教授 (10228645)
種田 晃人 弘前大学, 理工学研究科, 准教授 (70332492)
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| 研究期間 (年度) |
2012-04-01 – 2015-03-31
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| キーワード | ウイロイド / 非コードRNA / RNAサイレンシング / スモールRNA / 病原性 / ウイロイド抵抗性 |
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| 研究実績の概要 |
Ⅰ．ウイロイド特異的small RNA生合成経路―品種特性・組織特異性と病原性： ① PSTVdの強毒型と弱毒型間で可変領域と右末端領域に見られる3箇所（118、126、201番）の変異を相互交換した14種類の変異体をトマトに接種し、PSTVdの病原性領域と可変領域・右末端領域が病原性に果たす役割を分析した。変異は単独でも連鎖させても変異体は安定に複製増殖した。また、201番は自然界にない変異に変えても安定に複製し、自由に変化できる塩基であった。これら3塩基はどの組合せでも複製、増殖能に与える影響は小さく、PSTVdの病原性は病原性領域の性質に強く支配されていた。強毒型では弱毒型に比べて病原性領域から多量のPSTVd特異的small RNAが生成していたことから、この領域に由来するsmall RNAが病原性の強さに関与する可能性が示唆された。② PSTVdの201番の変異は移行への関与が示唆されるVirP1蛋白質と結合するRYモチーフ近傍に生じていた。RNAiでVirP1発現量を抑制した形質転換体トマトにPSTVdの強毒型、弱毒型、キメラ変異体を感染させても感染率に変化は見られなかったが、201番の塩基を改変しRYモチーフの2次構造を変化させると感染性が喪失した。
Ⅱ．ウイロイド標的RNAサイレンシングと病原性発現機構： ① RNAiでgibberellinβ-hydroxylase遺伝子発現を抑制したトマトを育成し、T1世代個体のsiRNA発現量を分析した結果、高濃度のgibberellinβ-hydroxylase遺伝子特異的siRNAが蓄積していた。
Ⅲ．ウイロイドを標的とするRNAサイレンシングとウイロイド抵抗性機構： ① 様々なPSTVd由来配列のヘアピンRNAを発現する形質転換N.benthamiana系統（T3）を選抜・育成した結果、最短で26塩基のPSTVd由来配列のヘアピンRNAを発現させることでPSTVd特異的small RNAを誘導させ、PSTVdの感染・増殖を阻害できることが明らかになった。
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| 現在までの達成度 (段落) |
26年度が最終年度であるため、記入しない。
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| 今後の研究の推進方策 |
26年度が最終年度であるため、記入しない。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
26年度が最終年度であるため、記入しない。
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| 次年度使用額の使用計画 |
26年度が最終年度であるため、記入しない。
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