| 研究課題/領域番号 |
24380053
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| 研究機関 | 東京大学 |
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研究代表者 |
伏信 進矢 東京大学, 農学生命科学研究科, 教授 (00302589)
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| 研究分担者 |
芦田 久 近畿大学, 生物理工学部, 教授 (40379087)
藤田 清貴 鹿児島大学, 農学部, 助教 (20381189)
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| 研究期間 (年度) |
2012-04-01 – 2015-03-31
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| キーワード | 糖質分解酵素 / ビフィズス菌 / 血液型抗原 / β-アラビノオリゴ糖 / 複合糖鎖 |
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| 研究概要 |
４種類のターゲット①B-GalABb、②NagBb、③HypBA2、④HypBA1）の結晶化と構造解析を行った。
①B-GalABbでは、24-700残基のコンストラクト(B-GalABb-del700)を用いて安定な結晶化条件を確立した。SeMet置換体も作成したが置換率が低く利用できなかった。重原子置換体を作成して数種のデータを測定したが、現時点では初期位相を決定できておらず、引き続き条件探索を行う。
②NagBbでは、PEG6000を沈殿剤とした条件で結晶が得られ分解能2.8 Aのデータセットを取った。しかしその後、結晶化の再現性が得られておらず、引き続き条件探索を行う。
③HypBA2では、前年度までに安定性が高いことが確認されたC末端側を300～537残基欠失したCΔ300、CΔ404、CΔ537を用いて結晶化を行った。いつくかの条件で微結晶が得られたので、構造解析に適した結晶を得るため、引き続き条件検討を行う。
④HypBA1ではさらにアラビノース複合体の結晶構造を決定した。15種類の変異体を作成し、詳細な生化学的解析を行った結果をまとめて、査読付き原著論文を発表した。GH127として世界初の立体構造の報告である。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
1: 当初の計画以上に進展している
理由
４つのターゲットのうちすでにその一つで構造決定に成功し、原著論文の発表まで達成したため。さらに、もう１つのターゲットでは既に安定な結晶化条件が得られている。
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| 今後の研究の推進方策 |
立体構造の決定に成功した④HypBA1に関しては、活性中心がシステインである可能性が高いため、アラビノース以外のリガンドとの複合体の構造決定を目指す。①B-GalABb-del700は結晶化条件が確定しているため、位相決定を目指す。他のターゲットに関しては、結晶化の条件検討を行う。研究計画に特に変更はない。
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