| 研究課題/領域番号 |
24380162
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| 研究機関 | 北海道大学 |
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研究代表者 |
木村 享史 北海道大学, (連合)獣医学研究科, 教授 (90261338)
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| 研究分担者 |
佐々木 宣哉 北里大学, 獣医学部, 教授 (20302614)
大西 なおみ 北海道大学, 人獣共通感染症リサーチセンター, 助教 (50507217)
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| 研究期間 (年度) |
2012-04-01 – 2016-03-31
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| キーワード | ヘルペスウイルス / ウマ / レセプター / トランスジェニックマウス |
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| 研究概要 |
ウマヘルペスウイルス1型（EHV-1）レセプターであるウマMHCクラスI分子をEHV-1標的細胞に強発現するトランスジェニックマウス（Tgマウス）を作製し、新たなEHV-1感染モデルとして確立する目的で、平成25年度は以下の実験を行った。
ユビキタスなプロモーターを有する遺伝子発現ユニットCAG-A68-B2Mを導入した受精卵移植マウスより得られた67匹の産仔をジェノタイピングPCRで解析したところ、12匹のファウンダーが得られた。RT-PCR、ウエスタンブロットによって導入遺伝子に由来するmRNA、蛋白を複数の組織中に発現するラインを2つ選別し、うち1ラインのF2にEHV-1プロトタイプ株であるAb4株を経鼻接種した。接種後3日目のマウス肺よりDNAを抽出し、EHV-1ゲノム量を半定量したところ、Tgマウス肺では野生型マウス肺に比較してより高いレベルのEHV-1ゲノムDNAが検出された。従って、Tgマウス（A68-B2Mマウス）は野生型マウスに比較してより高いEHV-1感受性を示すことが示唆された。
また、組織特異的なウマMHCクラスI分子の発現を可能とするCAG-loxP-Stop-loxP-A68-B2M ユニットを導入した受精卵移植マウスより得られた119匹の産仔をジェノタイピングPCRで解析したところ、5匹のファウンダーが得られた。RT-PCRによる解析で、導入遺伝子に由来するmRNAを組織中に発現するラインを2つ選別した（LSL-A68-B2Mマウス）。
A68-B2Mマウス2ラインに対し、BALB/cマウスをレシピエント系統としたバッククロスを開始し、継続中である。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
遺伝子組換え実験の大臣確認に予想以上の時間を要したため、平成24年度においてTgマウスの作出開始に遅れが生じた。その影響でウイルス持続感染部位の同定などの表現型の解析がやや遅れているが、それ以外はおおむね順調に進展している。
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| 今後の研究の推進方策 |
ウマに流産を惹き起こすが神経病原性を示さないEHV-1 HH1株と神経病原性株であるAb4株をそれぞれA68-B2Mマウスに感染させ、病態を比較する。また、EHV-1持続感染Tgマウスもしくは持続感染細胞からのウイルス再活性化を試みる。また、平成25年度に引き続き、TgマウスのBALB/cマウスへのバッククロスを継続する。
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| 次年度の研究費の使用計画 |
委託先機関における遺伝子組換え実験の大臣確認に時間を要したため、平成24年度においてTgマウスの作出に遅れが生じた。これによってTgマウスの選別とバッククロスに必要な消耗品費を25年度および26年度に持ち越したため、当該助成金が発生した。
実験の進行に伴って当該助成金は速やかに使用される。また、当初の研究実施計画に基づき平成26年度の研究が実行され、同年度に計上された経費が使用される予定である。
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