| 研究課題/領域番号 |
24380172
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| 研究機関 | 大阪府立大学 |
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研究代表者 |
稲葉 俊夫 大阪府立大学, 生命環境科学研究科(系), 教授 (00137241)
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| 研究分担者 |
今井 裕 京都大学, (連合)農学研究科(研究院), 教授 (10303869)
杉浦 喜久弥 大阪府立大学, 生命環境科学研究科(系), 准教授 (30171143)
鳩谷 晋吾 大阪府立大学, 生命環境科学研究科(系), 准教授 (40453138)
玉田 尋通 大阪府立大学, 生命環境科学研究科(系), 教授 (10155252)
川手 憲俊 大阪府立大学, 生命環境科学研究科(系), 准教授 (80221901)
谷 浩行 大阪府立大学, 生命環境科学研究科(系), 准教授 (00305658)
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| 研究期間 (年度) |
2012-04-01 – 2016-03-31
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| キーワード | 再生医療 / 統合動物科学 / ES細胞 / iPS細胞 / バイオテクノロジー / イヌ |
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| 研究実績の概要 |
本研究は、ヒトと共通の疾病が自然発症するイヌに着眼し、ヒト再生医療の実用化を円滑に進め得るトランスレーショナルリサーチの一つとして、イヌ胚性幹細胞（ES細胞）および人工多能性幹細胞（iPS細胞）の血液系再生医療に向けた応用的基盤技術の開発を目的としている。本研究年度では、3種類のリプログラミング誘導系を用いたiPS細胞の作製、継代、および本細胞から間葉系幹細胞(MSC)への分化誘導について検討し、以下の結果を得た。
1. イヌ胎子線維芽細胞を用い、ヒトOCT3/4、SOX2、KLF4およびc-MYC（山中4因子）など種々の初期化遺伝子を組み込んだプラスミドDNA（染色体に組み込まれないエピソーマルベクター）をエレクトロポレーション法で遺伝子導入することにより、核／細胞質比の高いiPS様細胞コロニーが得られ、6継代まで維持できた。一方、ドキシサイクリン誘導性レンチウイルスベクターを用いることにより、本薬剤依存性に増殖する類似の細胞コロニーが得られ、30継代以上維持できた。さらに、細胞質内で自らのゲノムを複製して目的タンパク質を作るセンダイウイルスベクターを用いても類似の細胞コロニーが得られ、7継代まで維持できた。
2. 上記のドキシサイクリン誘導性イヌiPS様細胞は、OCT3/4、NANOGなどの未分化マーカーを発現し、浮遊培養にて胚様体を形成し、三胚葉へ分化することが確認された。さらに、本iPS様細胞は単一細胞での継代が可能で、しかも、フィーダー細胞を必要とせずに、マトリゲル上で増殖・継代させることができた。
3. 上記のドキシサイクリン誘導性イヌiPS様細胞をMSC分化培地で培養することにより、紡錘形の形態を示し、CD44およびCD90陽性、CD34およびCD45陰性を示すMSC様細胞が得られた。本MSC様細胞は骨および神経への分化能を有し、9継代以上維持できた。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
今年度に予定していた①細胞の凍結保存法、および②臨床応用には至らず、来年度から行うこととなったため。
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| 今後の研究の推進方策 |
今年度に引き続いて、①細胞の長期継代培養法および凍結保存法の確立、②piggyBacおよびドキシサイクリンを用いたリプログラミング誘導系によるiPS細胞の安定的樹立と細胞分化制御、③イヌ固有の幹細胞成長因子、顆粒球コロニー刺激因子などの特異的サイトカインを用いて、イヌES細胞・iPS細胞から血小板および顆粒球等の血液系細胞へ効率的に分化誘導する技術の開発、および④iPS細胞の臨床応用を目指す。
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