研究課題
本研究では、細胞内セカンドメッセンジャーであるホスファチジルイノシトール-３,４,５-三リン酸（ＰＩＰ３）を、アシル基の観点から細分してとらえ、多種類であることを明示する。そのために、脂肪酸組成を含めたＰＩＰ３の解析技術を開発する。そしてＰＩＰ３代謝酵素欠損マウスやアシル基転移酵素欠損マウスを利用して、ＰＩＰ３分子種の動態変化と細胞機能変化とを包括して解析する。本年度は、昨年度までに構築完了した新規のＰＩＰ３分子種解析法を用いて、ＳＨＩＰ1欠損細胞とＰＴＥＮ欠損細胞におけるＰＩＰ３分子種について解析した。その結果、両者ともに変動するＰＩＰ３分子種と、片方のみで変動するＰＩＰ３分子種が存在することを見出した。次に、ＳＨＩＰ1およびＰＴＥＮの過剰発現細胞を作製してＰＩＰ３分子種を比較したところ、欠損細胞で変動したＰＩＰ３分子種の減少を確認することができた。３種のＬｙｓｏＰＩアシル転移酵素欠損マウスにおけるＰＩの分子種を測定したところ、２種については既報の分子種の変化が確認できたが、１種についてはこれまでの報告とは異なる分子種の変化が認められた。これら３種のＬｙｓｏＰＩアシル転移酵素欠損マウスとＳＨＩＰ１欠損マウスとを交配したところ、ＳＨＩＰ１単独の欠損マウスの表現型を回復させる分子が存在することを見出した。そこでＳＨＩＰ１とＬｙｓｏＰＩアシル転移酵素のダブルミュータントマウスを用いて、ＰＩＰ３分子種と細胞機能について解析を進めた。
2: おおむね順調に進展している
独自の遺伝子欠損マウスや測定技術を利用することで、当初の計画通り、ＰＩＰ３分子種の変動と細胞機能についての解析が進んでいる。
ＰＩＰ３分子種の動態変化と細胞機能変化の包括的解析をめざし、引き続きＰＩＰ３代謝酵素やＬｙｓｏＰＩアシル転移酵素欠損マウスを利用した解析、リコンビナントタンパク質を用いた脱リン酸化活性測定、ＰＩＰ３分子種の下流分子の同定を行う。
計画通りに研究は進展しているが、本年度に解析に着手している遺伝子欠損マウスを用いた解析を次年度にも引き続き解析する必要がある。そのため、本年度に計上していたマウス実験関連経費の一部を次年度に繰り越した。次年度に繰り越した研究費は、遺伝子改変マウスの飼育、実験関連経費として使用する。
すべて 2014 2013 その他
すべて 雑誌論文 (5件) (うち査読あり 5件) 学会発表 (6件) (うち招待講演 3件) 図書 (4件) 備考 (1件)
Nat Commun
巻: 4 ページ: 2763-2768
10.1038/ncomms3763.
J Biol Chem
巻: 288 ページ: 11436-11447
10.1074/jbc.M112.437103.
Lipids Health Dis.
巻: 12 ページ: 68-81
10.1186/1476-511X-12-68
J. Exp. Med.
巻: 210 ページ: 1217-1234
10.1084/jem.20121887
Lipids
巻: 48 ページ: 1253-1267
10.1007/s11745-013-3848-5
