研究課題
真核生物の細胞が増殖する時に遺伝情報がコードされている染色体DNAは細胞分裂毎に厳密に一回だけ複製されなければならない。DNA複製の過不足はただちに遺伝情報の変異を誘発し、癌などの疾病の発症原因となる。細胞はDNA複製の厳密さを担保するために複製起点をライセンシング化している。我々はDNA損傷がG1期に発生した時にDNA修復が完了するまでライセンシングを抑制する機構が存在するのではないかと考えて、チェックポイントにより制御されうるライセンシング因子を探索した。この結果、ATM/ATRはチェックポイント機構に重要なキナーゼであるが、このキナーゼの基質となるコンセンサス配列pSQ/TQがUVダメージ後にリン酸化されるライセンシングco-factor, HBO1ヒストンアセチルトランスフェラーゼを同定した。HBO1はCDT1依存的に複製起点にリクルートされ、周辺領域をアセチル化することによりMCM複合体のローディングを促すと報告されている。我々はHBO1のリン酸化の意義を明らかにするために解析を行った結果、ATM/ATR依存的なHBO1のリン酸化はHBO1の複製起点からの解離に必須であることを見出した。また、このリン酸化を阻害するとUV照射後においてMCM複合体のクロマチンへのローディングを抑制できず、DNAダメージ後のG１からS期への細胞周期停止に欠陥をきたすことがわかった。この原因を明らかにするためHBO1とCDT1の結合部位をFluoChase assayを用いて検討するとHBO1はCDT1のダメージ依存的分解に必須であるPIP boxを含む領域に結合している事を明らかにした。このためリン酸化の阻害によりHBO1が複製起点に維持され続けるとCDT1の分解を抑制するのであろうと予測される。
2: おおむね順調に進展している
DNA複製開始機構についてDNAダメージチェックポイントによるHBO1を介した新たな抑制機構を解明している事から。
HBO1と複製開始機構に関して以下の様な検討を行う。1. HBO1とCDT1およびJADE-1S３者間の結合様式を検討する。2. HBO1 S/TQ部位のリン酸化後のタンパク分解について検討する。3. HBO1 S/TQ部位のリン酸化を阻害した時の複製起点の発火までの時間を測定する。4. HBO1 S/TQ発現細胞の変異率を測定する。
CDT1の分解にHBO1との結合が影響する事が明らかになった事で構造解析を行う必要があるため。biacoreなどを用いてHBO1とCDT1, HBO1とJADE-1Sの結合親和性を検討するために使用する。
すべて 2013
すべて 雑誌論文 (3件) (うち査読あり 3件) 学会発表 (3件) (うち招待講演 2件)
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