• 研究課題をさがす
  • 研究者をさがす
  • KAKENの使い方
  1. 課題ページに戻る

2012 年度 実績報告書

乳癌進展における微小環境シグナリングのリン酸化プロテオミクス解析と組織での可視化

研究課題

研究課題/領域番号 24390087
研究種目

基盤研究(B)

研究機関三重大学

研究代表者

吉田 利通  三重大学, 大学院・医学系研究科, 教授 (80166959)

研究分担者 紅林 淳一  川崎医科大学, 医学部, 准教授 (10248255)
田中 典子 (花村 典子)  三重大学, 医学部附属病院, 講師 (60437100)
小塚 祐司  三重大学, 医学部附属病院, 講師 (50378311)
下條 尚志  三重大学, 医学部, 技術員 (70410751)
研究期間 (年度) 2012-04-01 – 2015-03-31
キーワード乳癌 / 癌進展 / 微小環境 / プロテオミクス / リン酸化
研究概要

本研究では、増殖因子・細胞外マトリックスなどで構成される癌組織内の微小環境からのチロシン(Tyr)リン酸化シグナルを対象として、実際の乳癌組織と培養細胞モデルのリン酸化タンパクとその部位を、リン酸化プロテオミクスの手法で比較する。これにより、リン酸化部位特異抗体による免疫組織化学研究に科学的な根拠を与える。プロテオミクス解析で関与シグナル分子とTyrリン酸化部位を網羅的に同定することにより、癌浸潤などの機構を研究するために有用な新規のリン酸化部位とその特異抗体を提供する。また、癌幹細胞のシグナルについてもプロテオミクス解析で検討する。これらの目的を達成するために、1)ヒト乳癌組織内のTyrリン酸化のプロテオミクス解析、2)微小環境を再構成した培養細胞を用いたTyrリン酸化と細胞機能との関連、3)ヒト乳癌組織内でのTyrリン酸化シグナルの免疫組織化学による解析、4)Tyrリン酸化と癌幹細胞との関連の解析を行っている。24年度では、1)10例のヒト乳癌組織から、正常部、癌境界部、癌中心部をそれぞれ採取し、タンパク試料を採取した。この試料のプロテオミクス解析に先んじて、2)の培養細胞サンプルのプロテオミクス解析を行い、細胞外マトリックスタンパクTenascin-C(TNC)とTGF-β1の添加がSRCとFAKのリン酸化を亢進させることを2D-WBで確認した。リン酸化チロシン抗体によるWBでも処理前後で差異が見られたものの顕著ではなく、検出が困難であることが示唆された。
3}では1)で採取された組織を特殊な固定液を用いることにより、すくなくともFAK925の癌細胞での意味があると考えられる染色像を検出でき、他の抗体でも可能性がある染色像が観察できた。4)では、MDA-MB-231乳癌細胞株へのTNC+TGF-β1添加により、乳癌幹細胞の分画が2倍に増加することが明らかとなった。

現在までの達成度 (区分)
現在までの達成度 (区分)

3: やや遅れている

理由

タンパクの2DゲルおよびそのWestern blotの解析は出来ているが、はっきりとした差異を示すスポットの確定およびその微量なタンパクのマススペクトロメトリーを行い検出するのがかなり困難であることがわかった。また、微量な検出を行う最新のマススペクトロメトリーの装置の本格的な稼動が遅れている。

今後の研究の推進方策

上記の理由により、マススペクトロメトリー解析に遅延が生じた。リン酸化については180ヶ所のリン酸化部位およびタンパクを直接かつ網羅的に検出するRPPA法によっても解析を始める。この方法では、TyrのみならずSer,Thrのリン酸化も検出可能である。

次年度の研究費の使用計画

RPPA法を委託するためおよび検出されたリン酸化部位の抗体での解析を増やす必要があり、それに対して今年度分の直接経費の繰越分を用いる。

  • 研究成果

    (27件)

すべて 2013 2012 その他

すべて 雑誌論文 (10件) (うち査読あり 7件) 学会発表 (15件) 図書 (1件) 備考 (1件)

  • [雑誌論文] Matricellular protein : a new player in cerebral vasospasm following subarachnoid hemorrhage2013

    • 著者名/発表者名
      Suzuki H, Shiba M, Fujimoto M, Kawamura K, Nanpei M, Tekeuchi E, Matsushima S, Kanamaru K. Imanaka-Yoshida K, Yoshida T, Taki W.
    • 雑誌名

      Acta Neurochir Suppl.

      巻: 115 ページ: 213-8

    • DOI

      10.1007/978-3-7091-1192-5_39.

    • 査読あり
  • [雑誌論文] 【Matricellularタンパク】テネイシン-C2013

    • 著者名/発表者名
      下條 尚志、橋詰 令太郎, 今中 恭子[吉田], 吉田 利通
    • 雑誌名

      臨床化学

      巻: 42 ページ: 5-12

  • [雑誌論文] Intratumoral Estrogen Concentration and Expression of Estrogen -Induced Genes in Male Breast Carcinoma : Comparison with Female Breast Carcinoma2013

    • 著者名/発表者名
      Takagi K, et al.
    • 雑誌名

      Hormones and Cancer

      巻: 4 ページ: 1-11

    • DOI

      10.1007/s12672-012-0126-6.

    • 査読あり
  • [雑誌論文] トリプルネガティブ乳癌の治療戦略2012

    • 著者名/発表者名
      紅林淳一
    • 雑誌名

      内分泌甲状腺外科学会雑誌

      巻: 29 ページ: 293-297

    • 査読あり
  • [雑誌論文] Antitumor and anticancer stem cell activity of a poly ADP-ribose polymerase inhibitor olaparib in breast cancer cells2012

    • 著者名/発表者名
      Shimo T, Kozuka Y, et.al
    • 雑誌名

      Breast cancer

      巻: 28 March(Epub ahead of print)

    • DOI

      10.1007/s12282-012-0356-z

    • 査読あり
  • [雑誌論文] 広範囲切除を必要といたAC領域乳癌に対しB-plasty応用の乳房温存手術を施行した1例2012

    • 著者名/発表者名
      小川朋子、花村典子、他
    • 雑誌名

      乳癌の臨床

      巻: 27 ページ: 745-749

  • [雑誌論文] 診断治療の工夫 腫瘍直上皮膚切除を必要とする乳房温存術における皮膚切開の工夫2012

    • 著者名/発表者名
      小川朋子、花村典子、他
    • 雑誌名

      乳癌の臨床

      巻: 27 ページ: 649-653

  • [雑誌論文] Tenascin-C induces prolonged constriction of cerebral arteries in rats

    • 著者名/発表者名
      Fujimoto M, Suzuki H, Shiba M, Shimojo N, Imanaka-Yoshida K, Yoshida T, Kanamaru K, Matsushima S, Taki W.
    • 雑誌名

      Neurobiol Dis.

      巻: (印刷中)

    • DOI

      10.1016/j.nbd.2013.01.007.

    • 査読あり
  • [雑誌論文] Atrial natriuretic peptide exerts protective action against angiotensin II-induced cardiac remodeling by attenuating inflammation via endothelin-1/endothelin receptor A cascade

    • 著者名/発表者名
      Fujita S, Shimojo N, Terasaki F, Otsuka K, Hosotani N, Kohda Y, Tanaka T, Nishioka T, Yoshida T, Hiroe M, Kitaura Y, Ishizaka N, Imanaka-Yoshida K.
    • 雑誌名

      Heart Vessels.

      巻: (印刷中)

    • DOI

      10.1007/s00380-012-0311-O

    • 査読あり
  • [雑誌論文] Marked lymphovascular invasion, progesterone receptor negativity and high Ki67 labeling index predict a poor outcome in breast cancer patients treated with endocrine therapy alone

    • 著者名/発表者名
      Kurebayashi J, et al.
    • 雑誌名

      Breast Cancer

      巻: (印刷中)

    • DOI

      10.1007/s12282-012-0380-z

    • 査読あり
  • [学会発表] Prognostic factors in HER2-positive breast cancer patients treated with adjuvant trastuzumab and chemotherapy2013

    • 著者名/発表者名
      Kurebayashi j, et al.
    • 学会等名
      The 12^<th> St. Gallen Breast Cancer Conference
    • 発表場所
      St. Gallen, Switzerland
    • 年月日
      2013-03-14
  • [学会発表] Effects of antiestrogens on the cell growth and regulation of cancer stem cell population in breast cancer cells2013

    • 著者名/発表者名
      Yamashita T, et al.
    • 学会等名
      The 12^<th> St. Gallen Breast Cancer Conference
    • 発表場所
      St. Gallen, Switzerland
    • 年月日
      2013-03-14
  • [学会発表] 術前組織が非浸潤癌の症例に対するセンチネルリンパ節生検の適応2012

    • 著者名/発表者名
      伊藤みのり、花村典子, 他
    • 学会等名
      日本臨床外科学会
    • 発表場所
      東京
    • 年月日
      20121100
  • [学会発表] 整容性を高める乳房手術とその長期成績 下部領域乳癌に対する乳房温存手術の長期成績とその術式選択2012

    • 著者名/発表者名
      山下雅子、花村典子, 他
    • 学会等名
      日本臨床外科学会
    • 発表場所
      東京
    • 年月日
      20121100
  • [学会発表] 当院における35歳以下乳癌症例についての検討2012

    • 著者名/発表者名
      柏倉由実、花村典子, 他
    • 学会等名
      日本乳癌検診学会
    • 発表場所
      沖縄
    • 年月日
      20121100
  • [学会発表] 乳房縮小術を応用したoncoplasic surgery2012

    • 著者名/発表者名
      花村典子
    • 学会等名
      日本乳癌学会
    • 発表場所
      熊本
    • 年月日
      20120600
  • [学会発表] 乳癌手術における整容性の追求 乳房下溝線部脂肪筋膜弁による再建法2012

    • 著者名/発表者名
      山下雅子、花村典子, 他
    • 学会等名
      日本乳癌学会
    • 発表場所
      熊本
    • 年月日
      20120600
  • [学会発表] 良悪性の鑑別が困難であった8cm大の嚢胞内腫瘤として描出された乳管内乳頭腫の一例2012

    • 著者名/発表者名
      野呂綾, 小塚祐司, 他
    • 学会等名
      第74回日本臨床外科学会
    • 発表場所
      東京
    • 年月日
      2012-11-30
  • [学会発表] 多発小嚢胞像を示したTisの検討2012

    • 著者名/発表者名
      野原有起, 小塚祐司、花村典子, 他
    • 学会等名
      第22回日本乳癌検診学会
    • 発表場所
      那覇
    • 年月日
      2012-11-09
  • [学会発表] DCIS診断を向上させるために 当院診断症例の検討2012

    • 著者名/発表者名
      柏倉由実, 小塚祐司、花村典子, 他
    • 学会等名
      第20回日本乳癌学会総会
    • 発表場所
      熊本
    • 年月日
      2012-06-29
  • [学会発表] 乳癌幹細胞の制御を指標とした新しい治療戦略2012

    • 著者名/発表者名
      紅林淳, 他
    • 学会等名
      第20回日本乳癌学会学術総会
    • 発表場所
      熊本(招待講演)
    • 年月日
      2012-06-28
  • [学会発表] トリプルネガティブ乳癌の治療戦略2012

    • 著者名/発表者名
      紅林淳一
    • 学会等名
      第24回日本内分泌外科学会総会
    • 発表場所
      名古屋(招待講演)
    • 年月日
      2012-06-09
  • [学会発表] テネイシン-Cの創る乳癌浸潤の微小環境2012

    • 著者名/発表者名
      吉田 利通
    • 学会等名
      第101回日本病理学会(座長)
    • 発表場所
      東京(招待講演)
    • 年月日
      2012-04-26
  • [学会発表] トリプルネガティブ乳癌のバイオロジー2012

    • 著者名/発表者名
      紅林淳一
    • 学会等名
      第28回日本乳腺甲状腺超音波診断会議
    • 発表場所
      岡山(招待講演)
    • 年月日
      2012-04-22
  • [学会発表] 乳癌のサブタイプ分類と個別化治療2012

    • 著者名/発表者名
      紅林淳一、園尾博司
    • 学会等名
      第112回日本外科学会定期学術集会
    • 発表場所
      幕張(招待講演)
    • 年月日
      2012-04-11
  • [図書] これからの乳癌診療2012-20132013

    • 著者名/発表者名
      紅林淳一
    • 出版者
      金原出版株式会社(in press)
  • [備考]

    • URL

      http://www.medic.mie-u.ac.jp/organization/course/pathol_matrix/

URL: 

公開日: 2014-07-16  

サービス概要 検索マニュアル よくある質問 お知らせ 利用規程 科研費による研究の帰属

Powered by NII kakenhi