| 研究課題/領域番号 |
24390104
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| 研究機関 | 千葉大学 |
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研究代表者 |
野田 公俊 千葉大学, 医学(系)研究科(研究院), 教授 (60164703)
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| 研究分担者 |
清水 健 千葉大学, 医学(系)研究科(研究院), 准教授 (70312840)
八尋 錦之助 千葉大学, 医学(系)研究科(研究院), 准教授 (80345024)
津々木 博康 大阪府立大学, 理学(系)研究科(研究院), 助教 (40586608)
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| 研究期間 (年度) |
2012-04-01 – 2016-03-31
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| キーワード | 腸管出血性大腸菌 / SubAB / 小胞体ストレス / lipid-raft |
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| 研究概要 |
non-O157型腸管出血性大腸菌(EHEC)が主に産生する新たな毒素Subtilase cytotoxin(SubAB)は、小胞体中に存在するシャペロン蛋白質BiPを分解し、その活性を阻害することによってERにストレスを起こし、細胞障害、致死を誘導すると考えられる。今年度は、SubAB の細胞内侵入機構を詳細に解析した。
これまでSubAB はクラスリンを介して細胞内侵入することがサル腎細胞由来 Vero 細胞で示されていた。今回、HeLa 細胞を用い、種々の阻害剤、遺伝子抑制により評価した。クラスリン、カベオリン、ダイナミンのノックダウンではSubAB の細胞内への取り込みは抑制されず、クラスリンの阻害剤、ダイナミンの阻害剤を用いた場合も同様の結果を得た。mbCD, filipin III によるLipid-raft の阻害は顕著にSubAB の取り込みを抑制していた。つまり、SubAB はlipid-raft を介して細胞内に侵入していると推察された。 更に、Na+/H+ exchange channel 阻害剤 EIPA、アクチン重合阻害剤cytochalasin DでSubAB の取り込みは抑制された。又、取り込まれたSubAB は TritonX-100 不溶性ベシクル、つまり、コレステロールリッチな膜で覆われていることが判った。以上の結果は、SubAB が比較的簡単に、多様な組織に取り込まれ、毒性を発揮しやすいことを裏付けている。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
SubAB の細胞内侵入機構を明らかにした点ではおおむね順調である。
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| 今後の研究の推進方策 |
今後の研究方針
1）今回明らかにしたSubAB の細胞内侵入を解析した際、ある抗炎症剤でSubAB の細胞障害性を抑制することを見いだした。更に、臨床で使用されている薬剤を用いて、取り込み機構への影響と作用メカニズムを明らかにする。
2）SubAB の細胞致死機構の解析結果をまとめ、論文として報告する。
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| 次年度の研究費の使用計画 |
現在投稿中の論文の掲載費請求が年度末にくる可能性があったが、リバイスの実験が予想よりも時間がかかったために、次年度使用額が生じた。
論文掲載費用として使用する。
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