Ｃ型肝炎ウイルス粒子形成におけるゲノムパッケージングの分子機構

2014 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 24390111
• 研究機関: 浜松医科大学
• 研究代表者: 鈴木 哲朗 浜松医科大学, 医学部, 教授 (00250184)
• 研究分担者: 鈴木 亮介 国立感染症研究所, ウイルス第二部, 研究員 (50342902) ; 伊藤 昌彦 浜松医科大学, 医学部, 助教 (50385423)
• 研究期間 (年度): 2012-04-01 – 2015-03-31
• キーワード: C型肝炎ウイルス / 複製 / 粒子形成 / パッケージング

研究実績の概要

昨年度までに、C型肝炎ウイルス(HCV)ゲノムの粒子へのパッケージングに重要なRNA cis-acting elementとしてゲノム3’末端側約200塩基長の非翻訳領域 (3’UTR) を同定した。本年度は、ゲノムパッケージングに関与する粒子構造タンパク質領域の解析を行った。
キャプシドタンパク質であるCoreには３カ所の塩基性アミノ酸クラスター; aa 6-13 (CL1), 39-43 (CL2), 59-70 (CL3)が存在する。各クラスターのリジンまたはアルギニンをそれぞれアラニンに置換した変異HCVゲノムを作製し細胞に導入して、ウイルス産生能が保持されるかを調べた。その結果、CL2、CL3変異ではウイルス産生能は完全に消失するのに対し、CL1変異ではウイルス産生能は維持されることが示された。
次に、CL2, CL3がゲノムパッケージングに重要であるかを明らかにするためトランスパッケージング (HCVtcp) 解析を行った。CL2またはCL3変異を持つCoreの場合、HCVtcpは全く産生されなかった。さらに、CL2、CL3変異がCore―HCV RNA結合能に影響するかを検証するため、試験管内で合成、精製した変異型また野生型Coreについて3’UTR RNA との結合効率をAlphaScreenで解析した。その結果、CL2またはCL3変異Coreは野生型Coreと同等のRNA結合能を有することが示された。CL1/CL2/CL3とも変異させた場合、RNAとの結合は顕著に低下した。
以上の結果より、HCV Coreの塩基性アミノ酸クラスターはHCV RNAとの結合、粒子産生に重要であることが示され、CL２及びCL3はCore-RNA結合後の過程（例えばキャプシドアセンブリー）にも関与する可能性が示唆された。

現在までの達成度 (段落)

26年度が最終年度であるため、記入しない。

今後の研究の推進方策

26年度が最終年度であるため、記入しない。

次年度使用額が生じた理由

26年度が最終年度であるため、記入しない。

次年度使用額の使用計画

26年度が最終年度であるため、記入しない。

研究成果

• [雑誌論文] Characterization of self-assembled virus-like particles of Merkel cell polyomavirus. (2015)
  • 著者名/発表者名: Li TC, Iwasaki K, Katano H, Kataoka M, Nagata N, Kobayashi K, Mizutani T, Takeda N, Wakita T, Suzuki T.
  • 雑誌名: PLOS ONE 巻: 10 ページ: e0115646.
  • DOI: 10.1371/journal.pone.0115646.
  • 査読あり / オープンアクセス / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] Targeting cellular squalene synthase, an enzyme essential for cholesterol biosynthesis, is a potential antiviral strategy against hepatitis C virus. (2015)
  • 著者名/発表者名: Saito K, Shirasago Y, Suzuki T, Aizaki H, Hanada K, Wakita T, Nishijima M, Fukasawa M.
  • 雑誌名: J. Virol. 巻: 89 ページ: 2220-2232
  • DOI: 10.1128/JVI.03385-14.
  • 査読あり
• [雑誌論文] Isolation and characterization of an huh.7.5.1-derived cell clone highly permissive to hepatitis C virus. (2015)
  • 著者名/発表者名: Shirasago Y, Sekizuka T, Saito K, Suzuki T, Wakita T, Hanada K, Kuroda M, Abe R, Fukasawa M.
  • 雑誌名: Jpn J Infect Dis. 巻: 68 ページ: 81-88
  • DOI: 10.7883/yoken.JJID.2014.231.
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Alternative endocytosis pathway for productive entry of hepatitis C virus. (2014)
  • 著者名/発表者名: Matsuda M, Suzuki R, Kataoka C, Watashi K, Aizaki H, Kato N, Matsuura Y, Suzuki T, Wakita T.
  • 雑誌名: J Gen Virol. 巻: 95 ページ: 2658-2667
  • DOI: 10.1099/vir.0.068528-0.
  • 査読あり
• [雑誌論文] Involvement of hepatitis C virus NS5A hyperphosphorylation mediated by casein kinase I-α in infectious virus production. (2014)
  • 著者名/発表者名: Masaki T, Matsunaga S, Takahashi H, Nakashima K, Kimura Y, Ito M, Matsuda M, Murayama A, Kato T, Hirano H, Endo Y, Lemon SM, Wakita T, Sawasaki T, Suzuki T.
  • 雑誌名: J Virol. 巻: 88 ページ: 7541-7555
  • DOI: 10.1128/JVI.03170-13.
  • 査読あり / オープンアクセス / 謝辞記載あり
• [学会発表] 3’UTR of HCV genome functioned as a cis-acting packaging signal (2014)
  • 著者名/発表者名: Guoli Shi, Tomomi Ando, Ryosuke Suzuki, Mami Matsuda, Masahiko Ito, Kenji Nakashima, Takaji Wakita and Tetsuro Suzuki
  • 学会等名: 第62回日本ウイルス学会学術集会
  • 発表場所: 横浜
  • 年月日: 2014-11-10 – 2014-11-12
• [学会発表] HuH-7由来オーバル細胞様細胞株HdoによるHCV生活環の調節に関わる分化関連宿主因子の同定 (2014)
  • 著者名/発表者名: 伊藤 昌彦、福原崇介、鈴木亮介、田川陽一、松浦善治、脇田隆字、鈴木哲朗
  • 学会等名: 第62回日本ウイルス学会学術集会
  • 発表場所: 横浜
  • 年月日: 2014-11-10 – 2014-11-12
• [学会発表] HCV 3’ UTR as a cis-acting element required for the viral RNA encapsidation (2014)
  • 著者名/発表者名: Guoli Shi, Tomomi Ando, Ryosuke Suzuki, Masahiko Ito, Kenji Nakashima, Takaji Wakita and Tetsuro Suzuki
  • 学会等名: 21st International Symposium on HCV and Related Viruses
  • 発表場所: Banff, Canada
  • 年月日: 2014-09-07 – 2014-09-11
• [学会発表] Use of HuH7-derived, Bidirectional Oval-like Cells to Identify Differentiation-dependent Host Factors That are Involved in Regulation of HCV Lifecycle (2014)
  • 著者名/発表者名: Masahiko Ito, Takasuke Fukuhara, Ryosuke Suzuki, Yoshiharu Matsuura, Takaji Wakita, Tetsuro Suzuki
  • 学会等名: 21st International Symposium on HCV and Related Viruses
  • 発表場所: Banff, Canada
  • 年月日: 2014-09-07 – 2014-09-11
• [図書] 感染 炎症 免疫 (2014)
  • 著者名/発表者名: 中島謙治、鈴木哲朗
  • 総ページ数: 2-86 (81-82)
  • 出版者: 医薬の門社