肝炎ウイルスによる免疫の攪乱、持続感染化、生体防御応答因子の再活性化による制御

2013 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 24390117
• 研究機関: 公益財団法人東京都医学総合研究所
• 研究代表者: 小原 道法 公益財団法人東京都医学総合研究所, ゲノム医科学研究分野, 副参事研究員 (10250218)
• 研究分担者: 安井 文彦 公益財団法人東京都医学総合研究所, ゲノム医科学研究分野, 主席研究員 (40399473)
• 研究期間 (年度): 2012-04-01 – 2015-03-31
• キーワード: C型肝炎ウイルス / 持続感染化 / 宿主免疫応答 / 脂肪変性 / ウイルス排除

研究概要

C型肝炎ウイルス(HCV)は感染後高率に持続感染化し、慢性肝炎、さらに肝細胞癌を発症し予後も悪い。HCV遺伝子をスイッチング発現できるトランスジェニックマウス（HCV Tgマウス）を樹立し、このマウスが持続的なHCV蛋白発現と免疫応答・慢性肝炎発症を起こし、肝硬変・肝がんを発症することを明らかにした。このマウスモデルを使用し、１）HCVの感染により修飾される肝臓細胞側因子および獲得免疫系の撹乱機序を明らかにする。２）さらに、免疫活性化に伴う蛋白質分解系の亢進が宿主細胞を殺傷せずにウイルス蛋白質を選択的に認識し排除する事を見いだしており、この機構について、細胞内及び個体レベルの両方から解析を行い、そのメカニズムを明らかにし、さらにその制御を目的とした。我々はこれまでにCre/loxPシステムでHCV遺伝子を導入したトランスジェニックマウス(Tgマウス)でC型慢性肝炎の病態（肝臓の索状構造の乱れ、脂肪化、グリコーゲンの蓄積、繊維化）を発症する事を報告してきた。さらに炎症性単球（IM）およびマクロファージ（Mφ）に着目して解析を進めたところ、このマウスの肝臓内では一般的な急性炎症部位で多く見られるM1Mφではなく、慢性炎症部位に見られる炎症性サイトカイン（IL-6, TNFa）を発現するM2Mφが優位に存在している事が分かった。また組換えワクシニアウイルスワクチンが良好な治療効果を示すが、HCVは樹状細胞下流の活性化を阻害してもいることが明らかとなった。この阻害過程を明らかにすることによって、治療ワクチンの効果の向上をめざす。

現在までの達成度 (区分)

2: おおむね順調に進展している

理由

組換えワクシニアウイルスワクチンが良好な治療効果を示すが、HCVは樹状細胞下流の活性化を阻害してもいることを明らかとした。この阻害過程を明らかにすることによって、治療ワクチンの効果のさらなる向上をめざす。

今後の研究の推進方策

免疫抑制因子の発現が上昇しており、免疫抑制シグナル経路によって炎症反応が抑制され、免疫寛容状態となっている可能性が考えられる。そこで、免疫寛容状態のCre/loxP/HCV-MxCre Tgマウスに抗PD1抗体およびPD-L1抗体等の同定された免疫抑制因子の抗体を投与し、免疫寛容の破綻を試みる。さらに、免疫寛容状態のマウスから分離したマウス脾細胞を正常マウス由来の脾細胞と共培養しCre/loxP/HCV-MxCre Tgマウスに移入し、免疫寛容を誘導するかどうかを検討する。このとき、脾臓および肝臓における炎症性サイトカインや抑制性サイトカインの発現量のプロファイリング、ALTの測定、肝臓の形態学的検索、FACSによるPD1およびPD-L1の発現量の検索を行い、ナイーブ脾細胞を移入した時との相違を比較解析する。

次年度の研究費の使用計画

脾臓および肝臓における炎症性サイトカインや抑制性サイトカインの発現量のプロファイリング、ALTの測定、肝臓の形態学的検索、FACSによるPD1およびPD-L1の発現量の検索を行い、ナイーブ脾細胞を移入した時との相違を比較解析する。
上記研究に使用する抗体及びヒトcDNAチップシステムの購入経費とする。

研究成果

• [雑誌論文] Recent Insights into Hepatitis B Virus-Host Interactions (2014)
  • 著者名/発表者名: Sayeh Ezzikouri, Makoto Ozawa, Michinori Kohara, Naima Elmdaghri , Soumaya Benjelloun , Kyoko Tsukiyama-Kohara
  • 雑誌名: J. Med. Virology 巻: 86 ページ: 925-932
  • DOI: 10.1002/jmv.23916
  • 査読あり / オープンアクセス / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] B-cell-intrinsic Hepatitis C virus expression leads to B-cell-lymphomagenesis and induction of NF-B signaling (2014)
  • 著者名/発表者名: Yuri Kasama, Takuo Mizukami, Hideki Kusunoki, Jan Peveling-Oberhag, Yasumasa Nishito, Makoto Ozawa, Michinori Kohara Toshiaki Mizuochi, Kyoko Tsukiyama-Kohara
  • 雑誌名: PLoSONE 巻: 9 ページ: e91373
  • DOI: 10.1371/journal.pone.0091373
  • 査読あり / オープンアクセス / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] Synthetic lipophilic antioxidant BO-653 suppresses HCV replication (2013)
  • 著者名/発表者名: Fumihiko Yasui, Masayuki Sudoh, Masaaki Arai, Michinori Kohara
  • 雑誌名: J. Med. Virol. 巻: 85 ページ: 241-249
  • DOI: 10.1002/jmv.23466
  • 査読あり
• [雑誌論文] Targeted induction of interferon-λ in humanized chimeric mouse liver abrogates hepatotropic virus infection (2013)
  • 著者名/発表者名: Shin-ichiro Nakagawa, Yuichi Hirata, Takeshi Kameyama, Yuko Tokunaga, Yasumasa Nishito, Kazuko Hirabayashi, Junichi Yano, Takahiro Ochiya, Chise Tateno, Yasuhito Tanaka, Masashi Mizokami, Kyoko Tsukiyama-Kohara, Kazuaki Inoue, Makoto Yoshiba, Akinori Takaoka and Michinori Kohara
  • 雑誌名: PLoSONE 巻: 8 ページ: e59611
  • DOI: 10.1371/journal.pone.0059611
  • 査読あり
• [雑誌論文] Kinetics of Peripheral Hepatitis B Virus-specific CD8+ T Cells in Patients with Onset of Viral Reactivation (2013)
  • 著者名/発表者名: Jun Aoki, Yuka Kowazaki, Takahiro Ohtsuki, Rumiko Okamoto, Kazuteru Ohashi, Seishu Hayashi, Hisashi Sakamaki, Michinori Kohara and Kiminori Kimura
  • 雑誌名: J. Gastroenterology 巻: 48 ページ: 728-737
  • DOI: 10.1007/s00535-012-0676-y
  • 査読あり
• [雑誌論文] Hepatitis C virus kinetics by administration of pegylated interferon-α in human and chimeric mice carrying human hepatocytes with variants of the IL28B gene (2013)
  • 著者名/発表者名: Tsunamasa Watanabe, Fuminaka Sugauchi, Yasuhito Tanaka, Kentaro Matsuura, Hiroshi Yatsuhashi, Shuko Murakami, Sayuki Iijima, Etsuko Iio, Masaya Sugiyama, Takashi Shimada, Masakazu Kakuni, Michinori Kohara, Masashi Mizokami
  • 雑誌名: Gut 巻: 62 ページ: 1340-1346
  • DOI: 10.1136/gutjnl-2012-302553
  • 査読あり
• [雑誌論文] A Serine Palmitoyltransferase Inhibitor Inhibits Hepatitis C Virus Replication in Human Hepatocytes (2013)
  • 著者名/発表者名: Asao Katsume, Yuko Tokunaga, Yuichi Hirata, Tsubasa Munakata, Makoto Saito, Hitohisa Hayashi, Koichi Okamoto, Yusuke Ohmori, Isamu Kusanagi, Shinya Fujiwara, Takuo Tsukuda, Yuko Aoki, Klaus Klumpp, Kyoko Tsukiyama-Kohara, Ahmed El-Gohary, Masayuki Sudoh, Michinori Kohara
  • 雑誌名: Gastroenterology 巻: 145 ページ: 865-873
  • DOI: 10.1053/j.gastro.2013.06.012
  • 査読あり
• [雑誌論文] DNA vaccine expressing the non-structural proteins of hepatitis C virus diminishes the expression of HCV proteins in a mouse model (2013)
  • 著者名/発表者名: Takeshi Wada, Michinori Kohara and Yasuhiro Yasutomi
  • 雑誌名: Vaccine 巻: 31 ページ: 5968-5974
  • DOI: 10.1016/j.vaccine.2013.10.037
  • 査読あり
• [雑誌論文] Isolation and characterization of highly replicable hepatitis C virus genotype 1a strain HCV-RMT (2013)
  • 著者名/発表者名: Masaaki Arai, Yuko Tokunaga, Asako Takagia, Yoshimi Tobita, Yuichi Hirata, Yuji Ishida, Chise Tateno, Michinori Kohara
  • 雑誌名: PLoSONE 巻: 8 ページ: e82527
  • DOI: 10.1371/journal.pone.0082527
  • 査読あり
• [学会発表] C型肝炎・肝硬変発症機序及びその制御を目指して (2014)
  • 著者名/発表者名: 小原 道法
  • 学会等名: 第22回桜山感染症研究会
  • 発表場所: 名古屋
  • 年月日: 20140121-20140121
  • 招待講演
• [学会発表] ワクシニアLC16m8株（HCV,SARS,Influenza）ベクター (2013)
  • 著者名/発表者名: 小原 道法
  • 学会等名: 第17回日本ワクチン学会学集会
  • 発表場所: 三重
  • 年月日: 20131130-20131201
  • 招待講演
• [備考] 公益財団法人東京都医学総合研究所
  • URL: http://www.igakuken.or.jp/