| 研究課題/領域番号 |
24390122
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| 研究種目 |
基盤研究(B)
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| 研究機関 | 昭和薬科大学 |
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研究代表者 |
石戸 聡 昭和薬科大学, 薬学部, 教授 (10273781)
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| 研究期間 (年度) |
2012-04-01 – 2015-03-31
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| キーワード | MHC class II / CD86 / ユビキチン / 寛容 / IgE |
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| 研究概要 |
MHC class II(MHC II)のユビキチン化消失により樹状細胞の機能が抑制される事、さらに、MHC IIのユビキチン化消失が樹状細胞の活性化によって起こる事から、MHC IIのユビキチン化が樹状細胞の活性化を抑制しているとの仮説を得た。さらにMHC IIのユビキチン化はそのE3ユビキチンリガーゼであるMARCH-Iにより制御されており、MARCH-Iの発現は樹状細胞の活性化によって抑制される事を見出している。これらの事から、樹状細胞は活性化シグナル(TLR等からのシグナル)を受けると、甑RCH-1の発現を抑制することによりMHC IIのユビキチン化を抑制し、安定的に抗原提示を行うが、それと同時にあるいは遅れて樹状細胞の抑制がMHC IIのユビキチン化消失によって行われていると考えた。従って、この仮説を検討する為に、(1)MARCH-Iの発現抑制の機構を解明する、(2)MHC IIのユビキチン化が消失しないマウスを作成する事を今年度の目標に設定した。(1)に関して、MARCH-Iタンパクが可視化出来るマウスの作成と解析へ向けての繁殖を行った。樹状細胞にてアミノ末端にFLAG tagが挿入されたMARCH-Iタンパク(MARCH-I-FLAG)を、ウエスタンブロットにて検出出来る事を確認した。また、樹状細胞の活性化によりMARCH-1タンパクが減少する事をMARCH-I-FLAGにて確認した。さらに、MARCH-Iの転写開始点を同定し、転写レベルにおける検討の準備が整った。(2)に関しても、すでに遺伝子改変マウスの準備が整いつつある。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
研究室の移動があり、遺伝子改変マウスの繁殖に遅れが出ると思われたが、現在順調にマウス管理がなされている。また、MARCH-I-FLAGタンパクの検出もすみやかに行われており、解析へ向けた準備は順調に整いつつある。従って、現在まで概ね順調に進んでいる。
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| 今後の研究の推進方策 |
MARCH-I FLAGマウスを用いて、生体内におけるMARCH-Iの発現制御機構を明らかにし、MARCH-Iの発現抑制を止める手法を考案する。MHC IIのユビキチン化が消失しないマウスを用いて、MHC IIユビキチン化の消失する意義に迫っていく。
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| 次年度の研究費の使用計画 |
MARCH-I FLAGマウスを用いて、免疫応答におけるMARCH-Iの発現の変化を調べる。また、同様の検討を、in vitroにて作成された樹状細胞にて検討する。MHC IIのユビキチン化が消失しないマウスを用いて、免疫応答がどのように変化するのかを詳細に検討する。また、研究室移動のため遅延したマウスの繁殖を、24年度残額を用いて速やかに行う。
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