神経筋接合部の正常構築と分子病態研究

2014 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 24390221
• 研究機関: 名古屋大学
• 研究代表者: 大野 欽司 名古屋大学, 医学(系)研究科(研究院), 教授 (80397455)
• 研究分担者: 増田 章男 名古屋大学, 医学(系)研究科(研究院), 准教授 (10343203) ; 伊藤 美佳子 名古屋大学, 医学(系)研究科(研究院), 助教 (60444402) ; 大河原 美静 名古屋大学, 高等研究院, 特任講師 (80589606)
• 研究期間 (年度): 2012-04-01 – 2015-03-31
• キーワード: 先天性筋無力症候群 / 神経筋接合部 / RSPO2 / LGR5 / LRP4

研究実績の概要

Wntが胎生期におけるアセチルコリン受容体(AChR)のクラスタリングに重要であることが知られてきたがそのシグナル伝達機構は十分に解明されていない。レーザーキャプチャーマイクロダイセクション法によりマウス脊髄前角細胞を単離しマイクロアレイ解析ならびにRNA-seq解析により網羅的な遺伝子発現を調べた。脊髄後角領域細胞をコントロールとした。脊髄前角細胞特異的に発現する複数の遺伝子のなかで、Wntシグナルを制御することが知られている細胞外分泌タンパクRspo2に着目して解析を行った。C2C12筋芽細胞に対するRspo2の付加ならびにsiRNAによるRspo2のノックダウン、並びに、Rspo2ノックアウトマウスの解析にてRspo2はWntを介するAChRクラスタリングに必須の分子であり、agrinの80%のAChRクラスタリング活性を有することが判明した。さらにRspo2の筋側受容体がLgr5であることを明らかにした。本研究はRspo2とLgr5がagrin/Lrp4/MuSKに次ぐ重要なAChRクラスタリング誘導因子であることを明らかにした。先天性筋無力症候群のexome capture resequencing解析, whole genome resequencing解析においてRSPO2とLGR5を候補遺伝子として解析を行ったが、原因遺伝子変異と思われるものは同定ができなかった。
先天性筋無力症候群の新規原因遺伝子としてLRP4を同定した。LRP4 の第3βプロペラドメイン内の部位特異的に神経筋接合部信号伝達障害ならびに骨形成障害が起きることを明らかにした。

現在までの達成度 (段落)

26年度が最終年度であるため、記入しない。

今後の研究の推進方策

26年度が最終年度であるため、記入しない。

次年度使用額が生じた理由

26年度が最終年度であるため、記入しない。

次年度使用額の使用計画

26年度が最終年度であるため、記入しない。

研究成果

• [雑誌論文] Congenital myasthenic syndrome in Japan: ethnically unique mutations in muscle nicotinic acetylcholine receptor subunits (2015)
  • 著者名/発表者名: Azuma Y, Nakata T, Tanaka M, Shen XM, Ito M, Iwata S, Okuno T, Nomura Y, Ando N, Ishigaki K, Ohkawara B, Masuda A, Natsume J, Kojima S, Sokabe M, Ohno K.
  • 雑誌名: Neuromuscul Disord 巻: 25(1) ページ: 60-69
  • DOI: 10.1016/j.nmd.2014.09.002
  • 査読あり / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] LRP4 third β-propeller domain mutations cause novel congenital myasthenia by compromising agrin-mediated musk signaling in a position-specific manner (2014)
  • 著者名/発表者名: Ohkawara B, Cabrera-Serrano M, Nakata T, Milone M, Asai N, Ito K, Ito M, Masuda A, Ito Y, Engel AG, Ohno K.
  • 雑誌名: Hum Mol Genet 巻: 23(7) ページ: 1856-1868
  • DOI: 10.1093/hmg/ddt578.
  • 査読あり / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] LDB3 splicing abnormalities are specific to skeletal muscles of patients with myotonic dystrophy type 1 and alter its PKC binding affinity (2014)
  • 著者名/発表者名: Yamashita Y, Matsuura T, Kurosaki T, Amakusa Y, Kinoshita M, Ibi T, Sahashi K, Ohno K.
  • 雑誌名: Neurobiol Disord 巻: 69 ページ: 200-205
  • DOI: 10.1016/j.nbd.2014.05.026.
  • 査読あり / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] Collagen Q is a key player for developing rational therapy for congenital myasthenia and for dissecting the mechanisms of anti-MuSK myasthenia gravis. (2014)
  • 著者名/発表者名: Ohno K, Ito M, Kawakami Y, Ohtsuka K.
  • 雑誌名: J Mol Neurosci 巻: 53(3) ページ: 359-361
  • DOI: 10.1007/s12031-013-0170-x.
  • 査読あり / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] HnRNP C, YB-1 and hnRNP L coordinately enhance skipping of human MUSK exon 10 to generate a Wnt-insensitive MuSK isoform (2014)
  • 著者名/発表者名: Nasrin F, Rahman MA, Masuda A, Ohe K, Takeda J, Ohno K.
  • 雑誌名: Sci Rep 巻: 4 ページ: 6841
  • DOI: 10.1038/srep06841.
  • 査読あり / オープンアクセス / 謝辞記載あり
• [学会発表] Alternative splicing of human MUSK exon 10 is physiologically regulated by multiple splicing regulatory cis-elements and cognate trans-factors (2014)
  • 著者名/発表者名: Rahman MA, Masuda A, Takeda J, Ohno K
  • 学会等名: RNA Biology meeting, Cold Spring Harbor Asia Conference
  • 発表場所: Suzhou, China
  • 年月日: 2014-11-10 – 2014-11-14
• [学会発表] IntSplice: A tool to predict aberrant splicing of an SNV at intronic positions -50 to -3 (2014)
  • 著者名/発表者名: Ohno K, Shibata A, Okuno T, Rahman MA, Azuma Y, Masuda A
  • 学会等名: 64th Annual Meeting of the American Society of Human Genetics
  • 発表場所: San Diego, California, USA
  • 年月日: 2014-10-18 – 2014-10-22
• [学会発表] Maintenance of the neuromuscular junction and its aberrations in hereditary and autoimmune disorders (2014)
  • 著者名/発表者名: Ohno K
  • 学会等名: Guarda-Symposium 2014 on the Molecular and Cell Biology of the Neuromuscular System
  • 発表場所: Guarda, Switzerland
  • 年月日: 2014-09-01 – 2014-09-01
  • 招待講演
• [図書] Molecular Genetics of Congenital Myasthenic Syndromes. in eLS. DOI: 10.1002/9780470015902.a0024314) (2014)
  • 著者名/発表者名: Ohno K, Ohkawara B, Ito M, Engel AG.
  • 総ページ数: Epub ahead of print (1-11)
  • 出版者: John Wiley & Sons, Inc., Hoboken, Chichester
  • DOI: 10.1002/9780470015902.a0024314
• [産業財産権] 骨格筋増量剤及びその用途 (2014)
  • 発明者名: 大野欽司、石黒直樹、飛田哲朗、松下雅樹
  • 権利者名: 国立大学法人名古屋大学
  • 産業財産権種類: 特許
  • 産業財産権番号: 特願2014-176248
  • 出願年月日: 2014-08-29