研究課題/領域番号 |
24390226
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研究種目 |
基盤研究(B)
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研究機関 | 独立行政法人国立精神・神経医療研究センター |
研究代表者 |
北條 浩彦 独立行政法人国立精神・神経医療研究センター, 神経研究所・神経薬理研究部, 室長 (60238722)
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研究分担者 |
永井 義隆 独立行政法人国立精神・神経医療研究センター, 神経研究所疾病研究第四部, 室長 (60335354)
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研究期間 (年度) |
2012-04-01 – 2015-03-31
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キーワード | RNAi / パーキンソン病 / 多重重複変異 / α-シヌクレイン / ショウジョウバエ |
研究概要 |
パーキンソン病のkey遺伝子であるα-シヌクレイン遺伝子は、その塩基配列変化(変異)だけでなく、正常型遺伝子の遺伝子増幅(多重重複変異)または高発現によってもパーキンソン病の発症に関与する。しかしながら、その様な原因で発症するパーキンソン病に対して未だ根本的な治療法は確立されていない。本研究は、RNAinterference(RNAi)の新しい利用法として遺伝子量補正型RNAiノックダウン法を新たに開発し、それを用いてα-シヌクレイン遺伝子増幅を伴うパーキンソン病に対する新しい治療法確立の道を開くことを目的とする。 本年度は、まず、遺伝子量補正型RNAiを誘導するためのsiRNAの設計とその評価を行った。この評価は、正確な定量が要求されるため、以前、対立遺伝子特異的RNAi研究で開発したルシフェラーゼレポーター遺伝子を用いたアッセイ系を基盤に評価システムを構築した。具体的には、ターゲットとなるα-シヌクレイン遺伝子の一部の領域の配列を合成し、それをルシフェラーゼ遺伝子の3'UTRに挿入したレポーター遺伝子を構築した。そして、ターゲット配列に対して様々なsiRNAを設計し、構築したレポーター遺伝子と共にHeLa細胞に導入してRNAiを誘導した。そして、ルシフェラーゼレポーター遺伝子の発現量を指標にどれだけ発現抑制を誘導できるsiRNAであるかを量的に評価した。この一連の評価から遺伝子量補正型RNAiを可能にするsiRNAの候補を抽出し、さらにIC50解析による詳細なデータの取得を行った。 ヒトα-シヌクレイン遺伝子に対するsiRNAの設計は本年度内において完了することができた。次の計画であるショウジョウバエモデルを使った実験のために、現在、ショウジョウバエ細胞内で遺伝子量補正型RNAiを誘導するsiRNAのスクリーニングを行っている。
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現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
新しいRNAi誘導法の確立であり多少の困難が予想されたが、siRNAの設計、合成、スクリーニングが順調に進みほぼ計画通りの達成となった。
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今後の研究の推進方策 |
研究は順調に進んでおり、来年度(H25年度)における研究計画の変更は考えていない。
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