白血病幹細胞根絶を目指した人工ＣＴＬによる新規免疫遺伝子治療の開発研究

2014 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 24390245
• 研究機関: 愛媛大学
• 研究代表者: 安川 正貴 愛媛大学, 医学(系)研究科(研究院), 教授 (60127917)
• 研究期間 (年度): 2012-04-01 – 2015-03-31
• キーワード: がん免疫療法 / 細胞障害性Ｔ細胞 / CAR-T細胞 / WT1 / 白血病 / 抗体療法

研究実績の概要

１．WT1特異的HLA-A24拘束性CTL クローンから単離したTCR遺伝発現ベクターをタカラバイオ株式会社との共同研究によって構築した。本ベクターは内在性TCR発現を抑制しする新規ベクターである。ヒト白血病細胞移植ヒト化マウスの実験系を用いて検討したところ、WT1-TCR-T細胞を養子免疫することによって、ヒト白血病細胞の増殖を抑制した。さらに、ヒト化マウス継代実験によって、ヒト白血病幹細胞を排除できる可能性が示唆された。WT1-TCR-CD4陽性T細胞は、WT1-TCR-CD8陽性CTLの細胞傷害性を増強させ、白血病細胞へのトラフィッキングを誘導した。WT1-TCRをヒト造血幹細胞に遺伝子導入し、HLA-A24トランスジェニック免疫不全NSGマウスに移植したところ、WT1特異的HLA-A24拘束性CTLがマウス体内で分化増殖することが示された。
２．CD16(FcγRⅢ)-CD3ζキメラレセプター遺伝子発現ベクターを作製し、抗体療法とCD16-CD3ζ遺伝子改変人工Ｔ細胞輸注との併用による新規がん免疫細胞療法を開発した。CD16-CD3ζキメラレセプター遺伝子発現レトロウイルスベクターを末梢血CD8陽性T細胞に遺伝子導入し、その機能を解析した。その結果、CD20陽性悪性リンパ腫細胞ならびにHer2/neu陽性乳がん細胞に対して、それぞれ抗CD20抗体および抗Her2抗体添加時に高いADCC活性を呈することが明らかとなった。CD20陽性B細胞性悪性リンパ腫細胞株をNOGマウスに移植し後、CD16-CD3ζキメラレセプター遺伝子導入CD8陽性T細胞および抗CD20抗体を様々な組み合わせで投与し、in vivoにおける抗腫瘍活性を検討した。その結果、CD16-CD3ζキメラレセプター遺伝子導入CD8陽性T細胞と抗CD20抗体を同時投与した際にのみ、高い抗腫瘍活性が認められた。

現在までの達成度 (段落)

26年度が最終年度であるため、記入しない。

今後の研究の推進方策

26年度が最終年度であるため、記入しない。

次年度使用額が生じた理由

26年度が最終年度であるため、記入しない。

次年度使用額の使用計画

26年度が最終年度であるため、記入しない。

研究成果

• [雑誌論文] Antileukemia multifunctionality of CD4+ T cells genetically engineered by HLA class I-restricted and WT1-specific T-cell receptor gene transfer (2015)
  • 著者名/発表者名: Fujiwara H, Ochi T, Ochi F, Miyazaki Y, Asai H, Narita M, Okamoto S, Mineno J, Kuzushima K, Shiku H, and Yasukawa M
  • 雑誌名: Leukemia 巻: in press ページ: in press
  • 査読あり / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] Cytotoxic T lymphocyte lysis of HTLV-1 infected cells is limited by weak HBZ protein expression, but non-specifically enhanced on induction of Tax expression. (2014)
  • 著者名/発表者名: Rowan AG, Suemori K, Fujiwara H, Yasukawa M, Tanaka Y, Taylor GP, Bangham C.
  • 雑誌名: Retrovirology 巻: 11 ページ: 116
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Gene-modified human alpha/beta-T cells expressing a chimeric CD16-CD3zeta receptor as adoptively transferable effector cells for anticancer monoclonal antibody therapy. (2014)
  • 著者名/発表者名: Ochi, F., Fujiwara, H., Tanimoto, K., Asai, H., Miyazaki, Y., Okamoto, S., Mineno, J., Kuzushima, K., Shiku, H., Barrett, J., Ishii, E. and Yasukawa, M
  • 雑誌名: Cancer Immunol Res. 巻: 2 ページ: 249-262
  • DOI: 10.1158/2326-6066.CIR-13-0099-T
  • 査読あり / オープンアクセス / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] Abnormal behaviors and developmental disorder of hippocampus in zinc finger protein 521 (ZFP521) mutant mice. (2014)
  • 著者名/発表者名: Ohkubo N, Matsubara E, Yamanouchi J, Akazawa R, Aoto M, Suzuki Y, Sakai I, Abe T, Kiyonari H, Matsuda S, Yasukawa M, Mitsuda N.
  • 雑誌名: PLoS One 巻: 9 ページ: e92848
  • DOI: 10.1371/journal.pone.0092848
  • 査読あり / オープンアクセス / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] Adoptive transfer of genetically engineered WT1-specific cytotoxic T lymphocytes does not induce renal injury (2014)
  • 著者名/発表者名: Asai H, Fujiwara H, Kitazawa S, Kobayashi N, Ochi T, Miyazaki Y, Ochi F, Akatsuka Y, Okamoto S, Mineno J, Kuzushima K, Ikeda H, Shiku H, Yasukawa M.
  • 雑誌名: J Hematol Oncol. 巻: 7 ページ: 3
  • DOI: 10.1186/1756-8722-7-3
  • 査読あり / オープンアクセス / 謝辞記載あり
• [学会発表] Activation Status of Integrin αIIbβ3 in Essential Thrombocythemia with Calreticulin Mutation (2014)
  • 著者名/発表者名: Jun Yamanouchi , Takaaki Hato, Etsuko Matsubara, Taichi Azuma, Hideyuki Nakanishi, Hiroshi Fujiwara, Yoshihiro Yakushijin, and Masaki Yasukawa
  • 学会等名: 56th ASH Annual Meeting
  • 発表場所: San Francisco
  • 年月日: 2014-12-06 – 2014-12-06
• [学会発表] Concomitant Administration of Gene-Modified T Cells Expressing a Chimeric CD16-CD3ζ Receptor with Mogamulizmab Synergistically Suppresses Adult T Cell Leukemia Cells in Vivo (2014)
  • 著者名/発表者名: Kazushi Tanimoto , Hiroshi Fujiwara, Hiroki Tanaka, Fumihiro Ochi , Hiroaki Asai, Sachiko Okamoto, JunichiMineno , Kiyotaka Kuzushima, Hiroshi Shiku, John Barrett, and Masaki Yasukawa
  • 学会等名: 56th ASH Annual Meeting
  • 発表場所: San Francisco
  • 年月日: 2014-12-05 – 2014-12-05
• [備考] 愛媛大学大学院医学系研究科血液・免疫・感染症内科学講座
  • URL: http://www.m.ehime-u.ac.jp/school/int.med1/