キメラ抗原受容体発現Ｔリンパ球を用いた難治性悪性リンパ腫に対する遺伝子治療法開発

2014 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 24390247
• 研究機関: 自治医科大学
• 研究代表者: 小澤 敬也 自治医科大学, 医学部, 客員教授 (30137707)
• 研究分担者: 塚原 智典 自治医科大学, 医学部, 講師 (10362120) ; 内堀 亮介 自治医科大学, 医学部, 助教 (20458285) ; 大嶺 謙 自治医科大学, 医学部, 講師 (90316521)
• 研究期間 (年度): 2012-04-01 – 2015-03-31
• キーワード: 遺伝子治療 / 免疫療法 / 細胞療法 / キメラ抗原受容体 / Tリンパ球 / 造血器腫瘍

研究実績の概要

本研究は、再発・難治性B細胞性非ホジキンリンパ腫を対象に、CD19抗原を認識するキメラ抗原受容体（CAR: chimeric antigen receptor）発現Tリンパ球を用いる養子免疫遺伝子療法を開発することを目的とした。研究成果は次の通りである。1) CAR発現Tリンパ球の抗腫瘍効果増強を目的に、CARの他にIL-21を発現させた。IL-21共発現型Tリンパ球では、IL-21産生と下流シグナルのSTAT3のリン酸化亢進を認めた。２）抗原特異的IFN-γ産生やヒトBリンパ腫細胞株に対する殺細胞効果は、IL-21発現による増強効果を認めなかった。3）担癌免疫不全マウスへの遺伝子改変Tリンパ球の投与実験では、腫瘍増殖抑制効果が認められたが、CAR単独とIL-21共発現型Tリンパ球の治療効果に有意な差を認めなかった。４）抗腫瘍サイトカインなどを併用した場合の安全対策として、腫瘍局所での発現を可能にする分子スイッチ（転写因子NF-AT誘導型プロモーター）を作製した。レポーター遺伝子を用いた解析から、本スイッチを導入したCAR発現Tリンパ球では、CARシグナル特異的な遺伝子発現制御が可能であることが試験管内および担癌マウスモデルで明らかになった。5）臨床研究と同様な方法で遺伝子改変Tリンパ球の調整を施設内細胞プロセシング室で行った。患者（同意済み）Tリンパ球へのCD19特異的CAR遺伝子の導入と体外増幅が可能であることと、それらのBリンパ腫細胞株に対する細胞傷害活性を試験管内で確認した。
再発・難治性B細胞性非ホジキンリンパ腫に対する養子免疫遺伝子療法の臨床研究については、遺伝子治療臨床研究「CD19抗原特異的キメラ抗原受容体発現Tリンパ球を用いた難治性B細胞性悪性リンパ腫に対する遺伝子治療臨床研究」が厚労省で承認された。臨床研究を開始し、患者登録を行っている。

現在までの達成度 (段落)

26年度が最終年度であるため、記入しない。

今後の研究の推進方策

26年度が最終年度であるため、記入しない。

次年度使用額が生じた理由

26年度が最終年度であるため、記入しない。

次年度使用額の使用計画

26年度が最終年度であるため、記入しない。

研究成果

• [雑誌論文] Corticospinal Tract Development and Spinal Cord Innervation Differ between Cervical and Lumbar Targets. (2015)
  • 著者名/発表者名: Kamiyama T, Kameda H, Murabe N, Fukuda S, Yoshioka N, Mizukami H, Ozawa K, Sakurai M.
  • 雑誌名: J Neurosci. 巻: 35 ページ: 1181-91
  • DOI: 10.1523/JNEUROSCI.2842-13.2015.
  • 査読あり
• [雑誌論文] Comparative analyses of adeno-associated viral vector serotypes 1, 2, 5, 8 and 9 in marmoset, mouse and macaque cerebral cortex. (2015)
  • 著者名/発表者名: Watakabe A, Ohtsuka M, Kinoshita M, Takaji M, Isa K, Mizukami H, Ozawa K, Isa T, and Yamamori T.
  • 雑誌名: Neurosci. Res. 巻: 93 ページ: 144-157
  • DOI: 10.1016/j.neures.2014.09.002.
  • 査読あり
• [雑誌論文] Distribution of serum erythropoietin levels in Japanese patients with myelodysplastic syndromes. (2015)
  • 著者名/発表者名: Suzuki T, Oh I, Ohmine K, Meguro A, Mori M, Fujiwara S, Yamamoto C, Nagai T, Ozawa K.
  • 雑誌名: Int J Hematol. 巻: 101 ページ: 32-36
  • DOI: 10.1007/s12185-014-1699-3.
  • 査読あり
• [雑誌論文] Central retinal vein occlusion caused by hyperviscosity syndrome in a young patient with Sjögren's syndrome and MALT lymphoma. (2015)
  • 著者名/発表者名: Yoshida A, Watanabe M, Ohmine K, Kawashima H.
  • 雑誌名: Int Ophthalmol. 巻: 35 ページ: 429-32
  • DOI: 10.1007/s10792-015-0056-8.
  • 査読あり
• [雑誌論文] The Tol2 transposon system mediates the genetic engineering of T-cells with CD19-specific chimeric antigen receptors for B-cell malignancies. (2015)
  • 著者名/発表者名: Tsukahara T, Iwase N, Kawakami K, Iwasaki M, Yamamoto C, Ohmine K, Uchibori R, Teruya T, Ido H, Urabe M, Mizukami H, Kume A, Nakamura M, Brentjens R, and Ozawa K.
  • 雑誌名: Gene Ther. 巻: 22 ページ: 209-15
  • DOI: 10.1038/gt.2014.104.
  • 査読あり / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] Long-term outcome of patients with acquired chronic pure red cell aplasia (PRCA) following immunosuppressive therapy: a final report of the nationwide cohort study in 2004/2006 by the Japan PRCA collaborative study group. (2015)
  • 著者名/発表者名: Hirokawa M, Sawada K, Fujishima N, Teramura M, Bessho M, Dan K, Tsurumi H, Nakao S, Urabe A, Fujisawa S, Yonemura Y, Kawano F, Oshimi K, Sugimoto K, Matsuda A, Karasawa M, Arai A, Komatsu N, Harigae H, Omine M, Ozawa K, Kurokawa M; PRCA Collaborative Study Group.
  • 雑誌名: Br J Haematol. 巻: in press ページ: in press
  • DOI: 10.1111/bjh.13376.
  • 査読あり
• [雑誌論文] Glial dysfunction in the mouse habenula causes depressive-like behaviors and sleep disturbance. (2014)
  • 著者名/発表者名: Cui W, Mizukami H, Yanagisawa M, Aida T, Nomura M, Isomura Y, Takayanagi R, Ozawa K, Tanaka K, and Aizawa H.
  • 雑誌名: J. Neurosci. 巻: 34 ページ: 16273-16285
  • DOI: 10.1523/JNEUROSCI.1465-14.2014
  • 査読あり
• [雑誌論文] Manufacturing and characterization of a recombinant adeno-associated virus type 8 reference standard material. (2014)
  • 著者名/発表者名: Ayuso E, et al
  • 雑誌名: Hum. Gene Ther. 巻: 25 ページ: 977-987
  • DOI: 10.1089/hum.2014.057
  • 査読あり
• [雑誌論文] Leukemia cells directly phagocytose blood cells in AML-associated hemophagocytic lymphohistiocytosis: A case report and review of the literature. (2014)
  • 著者名/発表者名: Hatano K, Nagai T, Matsuyama T, Sakaguchi , Fujiwara S.I, Oh I, Muroi K, and Ozawa K.
  • 雑誌名: Acta Haematol. 巻: 133 ページ: 98-100
  • DOI: 10.1159/000360840
  • 査読あり
• [雑誌論文] The bone marrow hematopoietic microenvironment is impaired in iron-overloaded mice. (2014)
  • 著者名/発表者名: Okabe H, Suzuki T, Uehara E, Ueda M, Nagai T, and Ozawa K.
  • 雑誌名: Eur. J. Haematol. 巻: 93 ページ: 118-128
  • DOI: 10.1111/ejh.12309
  • 査読あり
• [雑誌論文] Production of functional coagulation factor VIII from iPSCs using a lentiviral vector. (2014)
  • 著者名/発表者名: Kashiwakura Y, Ohmori T, Mimuro J, Madoiwa S, Inoue M, Hasegawa M, Ozawa K., and Sakata Y.
  • 雑誌名: Haemophilia 巻: 20 ページ: e40-44
  • DOI: 10.1111/hae.12311
  • 査読あり
• [雑誌論文] Novel anti-tumor mechanism of galanin receptor type 2 in head and neck squamous cell carcinoma cells. (2014)
  • 著者名/発表者名: Uehara T, Kanazawa T, Mizukami H, Uchibori R, Tsukahara T, Urabe M, Kume A, Misawa K, Carey T. E, Suzuki M, Ichimura K, and Ozawa K.
  • 雑誌名: Cancer Sci 巻: 105 ページ: 72-80
  • DOI: 10.1111/cas.12315.
  • 査読あり
• [雑誌論文] The prevalence of neutralizing antibodies against adeno-associated virus capsids is reduced in young Japanese individuals. (2014)
  • 著者名/発表者名: Mimuro J, Mizukami H, Shima M, Matsushita T, Taki M, Muto S, Higasa S, Sakai M, Ohmori T, Madoiwa S, Ozawa K, and Sakata Y.
  • 雑誌名: J. Med. Virol. 巻: 86 ページ: 1990-1997
  • DOI: 10.1002/jmv.23818.
  • 査読あり
• [雑誌論文] Mechanisms of resistance to azacitidine in human leukemia cell lines. (2014)
  • 著者名/発表者名: Sripayap P, Nagai T, Uesawa M, Kobayashi H, Tsukahara T, Ohmine K, Muroi K, Ozawa K.
  • 雑誌名: Exp Hematol. 巻: 42 ページ: 294-306.
  • DOI: 10.1016/j.exphem.2013.12.004.
  • 査読あり
• [雑誌論文] Cancer gene therapy using mesenchymal stem cells. (2014)
  • 著者名/発表者名: Uchibori R, Tsukahara T, Ohmine K, Ozawa K.
  • 雑誌名: Int J Hematol. 巻: 99 ページ: 377-82
  • DOI: 10.1007/s12185-014-1537-7.
  • 査読あり
• [雑誌論文] Intrathecal administration of high-titer cytomegalovirus immunoglobulin for cytomegalovirus meningitis. (2014)
  • 著者名/発表者名: Fujiwara S, Muroi K, Tatara R, Ohmine K, Matsuyama T, Mori M, Nagai T, Ozawa K.
  • 雑誌名: Case Rep Hematol. 巻: 2014 ページ: 1-3
  • DOI: 10.1155/2014/272458.
  • 査読あり
• [雑誌論文] Effect of Intra-Medullar and Intra-Venous Infusions of Mesenchymal Stem Cells on Cell Engraftment by In-Vivo Cell Tracking and Osteoinductivity in Rabbit Long Bones: A Pilot Study. (2014)
  • 著者名/発表者名: Ishihara A, Ohmine K, Weisbrode SE, Bertone AL.
  • 雑誌名: Orthop Muscular Syst. 巻: 3 ページ: 1-5
  • DOI: 10.4172/2161-0533.1000172
  • 査読あり
• [学会発表] CD19特異的キメラ抗原受容体発現Tリンパ球を用いた難治性B細胞性悪性リンパ腫に対する遺伝子治療 (2014)
  • 著者名/発表者名: 大嶺 謙
  • 学会等名: IMSUT-CGCTキックオフ・シンポジウム2014
  • 発表場所: 東京
  • 年月日: 2014-11-21
  • 招待講演
• [学会発表] Analysis of function and response specificity of a switch promoter driven by activation signals from a CD19-targeted chimeric antigen receptor. (2014)
  • 著者名/発表者名: Uchibori R, Takeshi T, Tsukahara T, Ohmine K, Riviere I, Brentjens RJ, Sadelain M, Mineno J, Takesako K, Ozawa K.
  • 学会等名: The 5th Meeting of Asian Cellular Therapy Organization.
  • 発表場所: 大阪
  • 年月日: 2014-11-11
• [学会発表] Tol2 transposon-based gene transfer of CD19-specific chimeric antigen receptors into human T-cells. (2014)
  • 著者名/発表者名: Tsukahara T, Iwase N, Yamamoto C, Ohmine K, Uchibori R, Teruya T, Ido H, Urabe M, Mizukami H, Kume A, Nakamura M, Brentjens R, Kawakami K and Ozawa K.
  • 学会等名: 第76回日本血液学会学術集会
  • 発表場所: 大阪
  • 年月日: 2014-11-02
• [学会発表] Activation signals from CAR permit NFAT-controlled inducible expression of transgenes in PBMCs. (2014)
  • 著者名/発表者名: Uchibori R, Ninomiya S, Tsukahara T, Ido H, Teruya T, Ohmine K, Urabe M, Mizukami H, Kume A, Riviere I, Sadelain M, Brentjens RJ, Mineno J, Ozawa K.
  • 学会等名: 第76回日本血液学会学術集会
  • 発表場所: 大阪
  • 年月日: 2014-11-02
• [学会発表] フィラデルフィア染色体陽性急性白血病に対するPSL併用Dasatinib療法の効果と安全性に関する報告 (2014)
  • 著者名/発表者名: 翁 家国, 多々良 礼音, 藤原 慎一郎, 大嶺 謙, 鈴木 隆浩, 永井 正, 室井 一男, 小澤 敬也
  • 学会等名: 第76回日本血液学会学術集会
  • 発表場所: 大阪
  • 年月日: 2014-10-31
• [学会発表] Activation signals from chimeric antigen receptors permit NFAT-controlled inducible expression of transgene in PBMCs. (2014)
  • 著者名/発表者名: Uchibori R, Ninomiya S, Tsukahara T, Ido H, Teruya T, Ohmine K, Urabe M, Mizukami H, Kume A, Mineno J, Ozawa K.
  • 学会等名: 第73回日本癌学会学術総会
  • 発表場所: 横浜
  • 年月日: 2014-09-26
• [学会発表] Generation of T-cells expressing a CD19-specific CAR by the Tol2 transposon system. (2014)
  • 著者名/発表者名: Tsukahara T, Ohmine K, Uchibori R, Urabe M, Mizukami H, Kume A, Nakamura M, Ozawa K.
  • 学会等名: 第73回日本癌学会学術総会
  • 発表場所: 横浜
  • 年月日: 2014-09-25
• [学会発表] キメラ抗原受容体からの抗原刺激特異的な遺伝子発現誘導系の開発. (2014)
  • 著者名/発表者名: 内堀 亮介, 二宮 空暢, 照屋 武志, 塚原 智典, 大嶺 謙, 峰野 純一, 竹迫 一任, 小澤 敬也.
  • 学会等名: 第6回血液疾患免疫療法研究会
  • 発表場所: 京都
  • 年月日: 2014-09-06
• [学会発表] Tol2 transposon-mediated gene transfer of CD19-CAR to primary human T-cells for the treatment of B-cell malignancies. (2014)
  • 著者名/発表者名: Tsukahara T, Iwase N, Yamamoto C, Ohmine K, Uchibori R, Takeshi T, Urabe M, Mizukami H, Kume A, Nakamura M, Brentjens R J, Kawakami K, Ozawa K.
  • 学会等名: 第20回日本遺伝子治療学会
  • 発表場所: 東京
  • 年月日: 2014-08-08
• [学会発表] The NFAT response elements in the IL-2 gene promoter permit visualization and quantification of activation status in CAR-expressing PBMCs. (2014)
  • 著者名/発表者名: Uchibori R, Ninomiya S, Tsukahara T, Ido H, Teruya T, Ohmine K, Urabe M, Mizukami H, Kume A, Riviere I, Sadelain M, Brentjens RJ, Mineno J, Ozawa K.
  • 学会等名: 第20回日本遺伝子治療学会
  • 発表場所: 東京
  • 年月日: 2014-08-08
• [学会発表] B細胞リンパ腫に合併した腫瘍随伴性天疱瘡と考えた1例 (2014)
  • 著者名/発表者名: 坂口 優, 宮本 有希子, 佐藤 篤子, 藤田 有理香, 小宮根 真弓, 村田 哲, 大槻 マミ太郎, 佐藤 一也, 大嶺 謙, 小澤 敬也
  • 学会等名: 第113回 日本皮膚科学会総会
  • 発表場所: 京都
  • 年月日: 2014-05-30
• [学会発表] Development of switch promoters that is activated to induce exogenous gene expression upon the recognition of CD19 by chimeric antigen receptors. (2014)
  • 著者名/発表者名: Uchibori R, Ninomiya S, Tsukahara T, Ido H, Teruya T, Ohmine K, Urabe M, Mizukami H, Kume A, Riviere I, Sadelain M, Brentjens RJ, Mineno J, Ozawa K.
  • 学会等名: 17th Annual Meeting of the American Society of Gene & Cell Therapy.
  • 発表場所: Washington, D.C.
  • 年月日: 2014-05-22
• [学会発表] 細胞療法の現状と将来 キメラ抗原受容体発現Tリンパ球を用いたB細胞性腫瘍に対する遺伝子治療 (2014)
  • 著者名/発表者名: 大嶺 謙
  • 学会等名: 第62回日本輸血・細胞治療学会総会
  • 発表場所: 奈良
  • 年月日: 2014-05-17
  • 招待講演