若年性骨髄単球性白血病に対する新規分子標的療法の開発

2013 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 24390262
• 研究機関: 名古屋大学
• 研究代表者: 小島 勢二 名古屋大学, 医学(系)研究科(研究院), 教授 (20313992)
• 研究分担者: 高橋 義行 名古屋大学, 医学(系)研究科(研究院), 准教授 (40432273) ; 嶋田 明 岡山大学, 医学(系)研究科(研究院), 講師 (70391836)
• 研究期間 (年度): 2012-04-01 – 2015-03-31
• キーワード: 若年型骨髄単球性白血病 / RASシグナル経路 / 全エクソーム解析 / SETBP1 / エピジェネティクス / メチル化解析

研究概要

現在JMMLに対しては造血幹細胞移植が唯一の有効な治療法とされるが、新規薬剤の開発も試みられている。RAS経路の恒常的活性化がみられることからFarnesyl transferase阻害剤であるR115777の臨床試験が米国では開始されている。今回、チロシンキナーゼ阻害薬であるDasatinibや細胞増殖シグナル伝達経路（ERK MAPキナーゼ経路）に存在するリン酸化酵素MEKの阻害剤であるMEK162についてJMMLの治療薬となる可能性について検討した。PTPN11、KRAS、CBL変異が判明しているJMML患者（5例）の骨髄血を用いて、GM-CSF(10ng/ml)添加、無添加の条件でコロニー形成能を検討した。この系に各種濃度のDsatinibやMEK162を添加した。造血コロニー形成はGM-CSFの添加、無添加群ともにDsatinibやMEK162の濃度依存性に抑制された。また、10日間液体培養した後に、フローサイトメトリーを用いたBrdU、SubG1法で増殖細胞やアポトーシスをおこした細胞の比率を定量的に検討した。造血コロニーと同様に、DasatinibやMEK162は濃度依存性に増殖細胞を抑制し、アポトーシスをおこした細胞数は増加した。予後良好とされるRAS変異患者由来の骨髄血は、治療抵抗性とされるPTPN11&SETBP1変異患者由来骨髄血と比較して、有意に増殖が抑制された。フローサイトメトリーをもちいたBrdU、SubG1法は簡便で、定量性にも優れ、JMMLに対する分子標的薬のスクリーニング法として有用である。

現在までの達成度 (区分)

1: 当初の計画以上に進展している

理由

JMMLの発症に関わる遺伝子を、92例を対象に次世代シークエンサーを用いて検討し、新規がん遺伝子であるSETBP1を発見した。
SETBP1は予後に関連し、分子標的となりうると考えられた（Nature Genetics 2013）。
また、遺伝子プロモーター領域におけるメチル化プロファイルを検討し、高メチル化群が予後不良であることを確認した。
本症に対する脱メチル化薬による治療の可能性が開かれた。

今後の研究の推進方策

エクソーム解析をおこなっても、原因遺伝子がみつからない症例が、JMML全体の10％にみられることから、これらの症例を対象に全ゲノム解析をおこない新規原因遺伝子の発見に努める。
我々が発見したSETBP1に対する分子標的薬のスクリーニングをおこない、候補薬剤を発見する。

次年度の研究費の使用計画

ノックアウトマウスを購入予定だったが、作成が年度内に間に合わなかったため。
ノックアウトマウスのデザイン・初回の受精卵へのインジェクションに50万、追加のインジェクションに25万、微生物検査に10万、輸送費に5万。

研究成果

• [雑誌論文] Long-term outcome after immunosuppressive therapy with horse or rabbit antithymocyte globulin and cyclosporine for severe aplastic anemia in children. (2014)
  • 著者名/発表者名: Jeong DC, Chung NG, Cho B, Zou Y, Ruan M, Takahashi Y, Muramatsu H, Ohara A, Kosaka Y, Yang W, Kim HK, Zhu X, Kojima S.
  • 雑誌名: Haematologica 巻: 99 ページ: 664-671
  • DOI: 10.3324/haematol.2013.089268
  • 査読あり
• [雑誌論文] Clinical characteristics of 15 children with juvenile myelomonocytic leukaemia who developed blast crisis: MDS Committee of Japanese Society of Paediatric Haematology/Oncology. (2014)
  • 著者名/発表者名: Honda Y, Tsuchida M, Zaike Y, Masunaga A, Yoshimi A, Kojima S, Ito M, Kikuchi A, Nakahata T, Manabe A.
  • 雑誌名: Br J Haematol 巻: in press ページ: in press
  • DOI: 10.1111/bjh.12796
  • 査読あり
• [雑誌論文] Variant ALDH2 is associated with accelerated progression of bone marrow failure in Japanese Fanconi anemia patients. (2013)
  • 著者名/発表者名: Hira A, Yabe H, Yoshida K, Okuno Y, Shiraishi Y, Chiba K, Tanaka H, Miyano S, Nakamura J, Kojima S, Ogawa S, Matsuo K, Takata M, Yabe M.
  • 雑誌名: Blood 巻: 122(18) ページ: 3206-3209
  • DOI: 10.1182/blood-2013-06-507962
  • 査読あり
• [雑誌論文] Spliceosomal gene mutations are frequent events in the diverse mutational spectrum of chronic myelomonocytic leukemia but largely absent in juvenile myelomonocytic leukemia. (2013)
  • 著者名/発表者名: Kar SA, Jankowska A, Makishima H, Visconte V, Jerez A, Sugimoto Y, Muramatsu H, Traina F, Afable M, Guinta K, Tiu RV, Przychodzen B, Sakaguchi H, Kojima S, Sekeres MA, List AF, McDevitt MA, Maciejewski JP.
  • 雑誌名: Haematologica 巻: 98(1) ページ: 107-113
  • DOI: 10.3324/haematol.2012.064048
  • 査読あり
• [雑誌論文] ACTN1 mutations cause congenital macrothrombocytopenia. (2013)
  • 著者名/発表者名: Kunishima S, Okuno Y, Yoshida K, Shiraishi Y, Sanada M, Muramatsu H, Chiba K, Tanaka H, Miyazaki K, Sakai M, Ohtake M, Kobayashi R, Iguchi A, Niimi G, Otsu M, Takahashi Y, Miyano S, Saito H, Kojima S, Ogawa S.
  • 雑誌名: Am J Hum Genet 巻: 92(3) ページ: 431-438
  • DOI: 10.1016/j.ajhg.2013.01.015
  • 査読あり
• [雑誌論文] Somatic SETBP1 mutations in myeloid malignancies. (2013)
  • 著者名/発表者名: Makishima H, Yoshida K, Nguyen N, Przychodzen B, Sanada M, Okuno Y, Ng KP, Gudmundsson KO, Vishwakarma BA, Jerez A, Muramatsu H, Sakaguchi H, Paquette RL, McDevitt MA, Kojima S, Saunthararajah Y, Miyano S, Shih LY, Ogawa S,Maciejewski JP.
  • 雑誌名: Nat Genet 巻: 45(8) ページ: 942-946
  • DOI: 10.1038/ng.2696
  • 査読あり
• [雑誌論文] Exome sequencing identifies secondary mutations of SETBP1 and JAK3 in juvenile myelomonocytic leukemia. (2013)
  • 著者名/発表者名: Sakaguchi H, Okuno Y, Muramatsu H, Yoshida K, Shiraishi Y, Takahashi M, Kon A, Sanada M, Chiba K, Tanaka H, Makishima H, Wang X, Xu Y, Doisaki S, Hama A, Nakanishi K, Takahashi Y, Yoshida N, Maciejewski JP, Miyano S, Ogawa S, Kojima S.
  • 雑誌名: Nat Genet 巻: 45(8) ページ: 937-941
  • DOI: 10.1038/ng.2698
  • 査読あり
• [雑誌論文] Rabbit antithymocyte globulin and cyclosporine as first-line therapy for children with acquired aplastic anemia. (2013)
  • 著者名/発表者名: Takahashi Y, Muramatsu H, Sakata N, Hyakuna N, Hamamoto K, Kobayashi R, Ito E, Yagasaki H, Ohara A, Kikuchi A, Morimoto A, Yabe H, Kudo K, Watanabe K, Ohga S, Kojima S, Japan Childhood Aplastic Anemia Study G.
  • 雑誌名: Blood 巻: 121(5) ページ: 862-863
  • DOI: 10.1182/blood-2012-11-465633
  • 査読あり
• [雑誌論文] The landscape of somatic mutations in Down syndrome-related myeloid disorders. (2013)
  • 著者名/発表者名: Yoshida K, Toki T, Okuno Y, Hama A, Muramatsu H, Hasegawa D, Nakamura K, Kanegane H, Tsukamoto K, Adachi S, Kawakami K, Kato K, Nishimura R, Izraeli S, Hayashi Y, Miyano S, Kojima S, Ito E, Ogawa S, et al.
  • 雑誌名: Nat Genet 巻: 45(11) ページ: 1293-1299
  • DOI: 10.1038/ng.2759
  • 査読あり
• [雑誌論文] Wiskott-Aldrich syndrome presenting with a clinical picture mimicking juvenile myelomonocytic leukaemia. (2013)
  • 著者名/発表者名: Yoshimi A, Kamachi Y, Imai K, Watanabe N, Nakadate H, Kanazawa T, Ozono S, Kobayashi R, Yoshida M, Kobayashi C, Hama A, Muramatsu H, Sasahara Y, Jakob M, Morio T, Ehl S, Manabe A, Niemeyer C, Kojima S.
  • 雑誌名: Pediatr Blood Cancer 巻: 60(5) ページ: 836-841
  • DOI: 10.1002/pbc.24359
  • 査読あり
• [学会発表] Clonal Evolution from Aplastic Anemia to Myelodysplastic Syndrome with Monosomy7. (2013)
  • 著者名/発表者名: Kojima S.
  • 学会等名: 7th International Congress on Shwachman-Diamond Syndrome.
  • 発表場所: Toronto, Canada
  • 年月日: 20131103-20131106
  • 招待講演
• [学会発表] The Asia Pacific prospective randomised study of standard vs low dose rabbit ATG in aplastic anemia.
  • 著者名/発表者名: Kojima S.
  • 学会等名: 39th Annual Meeting of the EBMT.
  • 発表場所: London, UK
  • 招待講演
• [学会発表] Clinical and genetic characterization of 17 Juvenile myelomonocytic leukemia patients with c-CBL mutations.
  • 著者名/発表者名: Muramatsu H, Sakaguchi H, Xu Y, Yoshida K, Okuno Y, Hama A, Takahashi Y, Makishima H, Maciejewski J.P, Ogawa S, Kojima S.
  • 学会等名: The 12th International Symposium on Myelodysplastic Syndromes.
  • 発表場所: Berlin, Germany
• [学会発表] Molecular Spectrum of Juvenile Myelomonocytic Leukemia Identified by Whole exome sequencing.
  • 著者名/発表者名: Sakaguchi H, Muramatsu H, Yoshida K, Okuno Y, Shiraishi Y, Sanada M, Chiba K, Tanaka H, Makishima H, Wang X, Xu Y, Doisak Si, Hama A, Nakanishi K, Takahashi Y, Yoshida N, Maciejewski JP, Miyano S, Ogawa S, Kojima S.
  • 学会等名: The 18th Congress of EHA.
  • 発表場所: Stockholm, Sweden
• [学会発表] Aplastic Anemia : Therapeutic updated in HSCT.
  • 著者名/発表者名: Kojima S.
  • 学会等名: 2013 International Forum on Bone Marrow Failure.
  • 発表場所: Tianjin, China
  • 招待講演
• [学会発表] Alternative Donor Transplant for Aplastic Anemia.
  • 著者名/発表者名: Kojima S.
  • 学会等名: The 3rd International Annual Updates on Breathroughs in Hematology.
  • 発表場所: Bangkok, Thailand
  • 招待講演
• [学会発表] Haploidentical vs Matched Unrelated Donor Transplant.
  • 著者名/発表者名: Kojima S.
  • 学会等名: The 3rd International Annual Updates on Breathroughs in Hematology.
  • 発表場所: Bangkok, Thailand
  • 招待講演
• [学会発表] Reports from APBMT Working Group.
  • 著者名/発表者名: Kojima S.
  • 学会等名: 18th APBMT 2013.
  • 発表場所: Ho Chi Minh, Vietnam
  • 招待講演
• [学会発表] Clinical and Genetic Characterization Of Patients With C-CBL Mutated Juvenile Myelomonocytic Leukemia By Whole-Exome/Deep Sequencing.
  • 著者名/発表者名: Muramatsu H, Sakaguchi H, Wang X, Yoshida K, Okuno Y, Sanada M, Xu Y, Doisaki S, Narita A, Kawashima N, Hama A, Takahashi Y, Yoshida N, Shiraishi Y, Chiba K, Tanaka H, Makishima H, Maciejewski J.P, Miyano S, Ogawa S, Kojima S.
  • 学会等名: The 55th ASH Annual Meeting and Exposition.
  • 発表場所: New Orleans, USA
• [学会発表] Aberrant DNA Methylation Is Associated With Poor Outcomes In Juvenile Myelomonocytic Leukemia.
  • 著者名/発表者名: Sakaguchi H, Muramatsu H, Wang X, Xu Y, Hibi Y, Kawashima N, Narita A, Doisaki S, Yoshida N, Hama A, Takahashi Y, Makishima H, Yamada K, Maciejewski JP, Kojima S.
  • 学会等名: The 55th ASH Annual Meeting and Exposition.
  • 発表場所: New Orleans, USA