網羅的遺伝子解析及び細胞工学的手法を用いた不明発熱症候群の原因解明

2012 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 24390263
• 研究種目: 基盤研究(B)
• 研究機関: 京都大学
• 研究代表者: 西小森 隆太 京都大学, 医学研究科, 准教授 (70359800)
• 研究分担者: 平家 俊男 京都大学, 医学研究科, 教授 (90190173) ; 八角 高裕 京都大学, 医学研究科, 講師 (00511891)
• 研究期間 (年度): 2012-04-01 – 2015-03-31
• キーワード: 自己炎症性疾患 / 自己炎症 / iPS細胞 / 遺伝子診断 / 体細胞モザイク / 軟骨分化 / 単細胞解析 / 次世代シークエンサー

研究概要

不明熱・周期性発熱の原因として自己炎症疾患が発見され、一部の自己炎症疾患の炎症機転の解明が進んだが、疾患特異的な病態は未解明である。本研究では、1)既知自己炎症疾患の網羅的遺伝子解析系を確立、2)不明発熱症例の網羅的遺伝子解析による新規責任遺伝子同定、3)患者末梢血・疾患特異的iPS細胞による不明発熱症例の病態解析・治療基盤の形成、4)自己炎症疾患の特徴的な病態の機序解明、を目的とし、その進捗状況を報告する。
計画A)不明発熱症例での既知自己炎症疾患遺伝子解析
既知自己炎症疾患遺伝子パネル(12遺伝子)を作成し、次世代シークエンサーを用いた遺伝子診断システムが整った。
計画B)不明発熱症例における体細胞モザイクの検討
Sanger法で変異のないTRAPS様症例でTNFRSFIAモザイク診断法を確立した。該当約100症例で解析中である。
計画C)不明発熱症例における網羅的遺伝子解析
真のNLRP3変異陰性CINCA症候群2例を含む13家系のエキソーム解析を終了し、遺伝子の絞り込みを行っている。
計画D)自己炎症疾患及び不明発熱症候群ips細胞ライブラリー作成
高IgD症候群5症例、真のNLRP3変異陰性clNcA症候群2症例のiPS細胞を作成した。
計画E)不明発熱症候群のiPS細胞および患者末梢血を用いた病態解析
高IgD症候群の単球系細胞分化を行い解析中である。発現解析系としてRNAseqを導入した。
計画F)CINCA症候群iPS細胞から軟骨細胞への分化誘導・病態解明
CINCA症候群iPS細胞より軟骨細胞分化に成功し、表現型を解析中である。

現在までの達成度 (区分)

2: おおむね順調に進展している

理由

計画したA)-H)それぞれが、概ね順調に経過している。現在計画G)については具体的な研究は未着手であるが、基本的な解析手法としてRNAseqを導入できている。

今後の研究の推進方策

現在順調に進捗しており、このまま推進していく。計画BにおいてはBlau症候群でも行い、計画Cでは症例数の増加を試みる。計画DではiPS細胞作成疾患としてTRAPS、PAPA症候群、Blau症候群、FMFを加える。計画Gは寒冷刺激による遺伝子発現変化をCAPSで行う。

次年度の研究費の使用計画

計画Gの着手が遅れたため、生じた助成金である。次年度に繰り越して、解析に着手する予定である。

研究成果

• [雑誌論文] Induced pluripotent stem cells from CINCA syndrome patients as a model for dissecting somatic mosaicism and drug discovery. (2012)
  • 著者名/発表者名: Tanaka, T., K. Takahashi, M. Yamane, S. Tomida, S. Nakamura, K. Oshima, A. Niwa, R. Nishikomori, N. Kambe, H. Hara, M. Mitsuyaraa, N. Morone, J. E. Heuser, T. Yamamoto, A. ffatanabe, A、Sato-Otsubo, S. Ogawa, I. Asaka, T. Heike, S. Yamanaka, T. Nakahata, and M. K. Saito
  • 雑誌名: Blood 巻: 120 ページ: 1299-1308
  • DOI: 10.1182/blood-2012-03-417881
  • 査読あり
• [雑誌論文] Guidelines for the genetic diagnosis of hereditary recurrent fevers. (2012)
  • 著者名/発表者名: Shinar, Y., L. Obici, I. Aksenti jevich, B. Bennetts, F. Austrup, I. Ceccherini, J. M. Costa, A. De Leener, M. Gattorno, U. Kania, I. Kone-Paut, S. Lezer, A. Livneh, I. Moix, R. Nishikomori, S. Ozen, L. Phylactou, L. Risom, D. Rowczenio, T. Sarkisian, M. E. van Gi jn, M. Witsch-Baumgartner, M. Morris, H. M. Hoffman, I. Touitou, and N. European Molecular Genetics Quality
  • 雑誌名: Ann Rheum Dis 巻: 71 ページ: 1599-1605
  • DOI: 10.1136/annrheumdis-2011-201271
  • 査読あり
• [雑誌論文] Detection of base substitution-type somatic mosaicism of the NLRP3 gene with >99.9% statistical confidence by massively parallel sequencing (2012)
  • 著者名/発表者名: Izawa, K., A. Hijikata, N. Tanaka, T. Kawai, M. K. Saito, R. Goldbach-Mansky, I. Aksentijevich, T. Yasumi, T. Nakahata, T. Heike, R. Nishikoraori, and O. Ohara
  • 雑誌名: DNA Res 巻: 19 ページ: 143-152
  • DOI: 10.1093/dnares/dsr047
  • 査読あり
• [学会発表] Cryopyrin-associated periodic syndromeの治療 本邦におけるcanakinumab臨床試験及びアナキンラ疫学調査について (2012)
  • 著者名/発表者名: 酉小森隆太、井澤和司、河合朋樹、八角高裕、平家俊男
  • 学会等名: 第40回日本臨床免疫学会
  • 発表場所: 東京
  • 年月日: 2012-09-28