| 研究課題/領域番号 |
24390426
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| 研究機関 | 九州大学 |
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研究代表者 |
赤峰 昭文 九州大学, 歯学研究科(研究院), 教授 (00117053)
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| 研究分担者 |
前田 英史 九州大学, 大学病院, 講師 (10284514)
和田 尚久 九州大学, 大学病院, 講師 (60380466)
門野内 聡 九州大学, 歯学研究科(研究院), 助教 (30609558)
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| 研究期間 (年度) |
2012-04-01 – 2015-03-31
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| キーワード | ヒト歯根膜細胞 / iPS細胞 / 神経堤細胞 |
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| 研究概要 |
iPS細胞から分化誘導した神経堤細胞様細胞の表面抗原をp75NTR抗体を用いて、FACS解析した結果、約9割の細胞が陽性反応を示し、その分離培養に成功した。この細胞を用いて、骨系細胞分化誘導培地（含アスコルビン酸、-グリセロリン酸、デキサメサゾン）にて５週間の培養を行い、アリザリンレッド染色を行った結果、陽性反応が認められ、骨系細胞へ分化することが明らかになった。一方、脂肪細胞誘導培地にて培養を試みたが、細胞のダメージが大きく十分な分化誘導を確認することはできなかった。つぎに、この神経堤細胞様細胞をヒト歯根膜初代培養細胞とフィルターを介して2週間の共培養を行った結果、歯根膜細胞のマーカーである、periodontal ligament-associated protein-1 (PLAP-1)/asporinならびにalkaline phosphatase (ALP)の遺伝子発現が約２倍に有意に促進し、初代ヒト歯根膜細胞によって、iPS細胞由来の細胞による歯根膜細胞様分化が誘導されることが示唆された。一方、初代ヒト歯根膜細胞の膜抗原による分化誘導の可能性について検討するために、培養皿に接着した歯根膜細胞を４％パラホルムアルデヒドで固定し洗浄後、この細胞上に神経堤細胞様細胞を播種した。同様に2週間培養を行ったが、神経堤細胞様細胞による歯根膜細胞分化は確認されなかった。以上の結果より、神経堤細胞様細胞の分化には元来の歯根膜細胞によって分泌される因子が重要であることが示唆された。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
iPS細胞由来の神経堤細胞様細胞は、そのマーカーであるp75NTRを高発現していることが証明された。この細胞による脂肪細胞分化に関する顕著な所見を得ることはできなかったが、骨系細胞分化に関しては明らかな所見を得ることができた。また初代ヒト歯根膜細胞から分泌される成分が、神経堤細胞様細胞による歯根膜細胞分化に影響することを明らかすることができた。
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| 今後の研究の推進方策 |
神経堤細胞様細胞による歯根膜細胞分化における、歯根膜細胞由来の分泌因子についてさらに解析を進めるために、細胞外基質タンパクおよぶ可溶性タンパクについて検証を進める。
さらに生体内での機能性を検証するために、歯根膜欠損実験モデルラットを作製し、これを用いて、生体内での歯根膜再生能について明らかにする。
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| 次年度の研究費の使用計画 |
25年度の研究成果より、歯根膜細胞が分泌する因子に、iPS細胞由来の神経堤細胞様細胞の歯根膜細胞分化を促進する可能性が示唆されたことから、この解析を進めるために計画の修正が必要になり、解析できる大学院生の増員が見込まれる次年度で研究を行う予定である。
iPS細胞由来の神経堤細胞様細胞による歯根膜細胞分化を誘導する因子について、遺伝子ならびにタンパクレベルでの解析を実施する。またこの細胞の生体内での機能解析を行うため動物実験を実施する。
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