| 研究課題/領域番号 |
24390450
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| 研究種目 |
基盤研究(B)
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| 研究機関 | 東京大学 |
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研究代表者 |
小笠原 徹 東京大学, 医学部附属病院, 講師 (20359623)
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| 研究分担者 |
筑田 博隆 東京大学, 医学部附属病院, 講師 (30345219)
緒方 直史 東京大学, 医学部附属病院, 講師 (10361495)
阿部 雅修 東京大学, 医学部附属病院, 助教 (10392333)
藤原 夕子 東京大学, 医学(系)研究科(研究院), 特任助教 (50466744)
茂呂 徹 東京大学, 医学部附属病院, 特任准教授 (20302698)
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| 研究期間 (年度) |
2012-04-01 – 2015-03-31
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| キーワード | 骨代謝 / 細胞周期 / ノックアウトマウス / クロマチン免疫沈降法 / 再生医学 |
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| 研究概要 |
本研究ではCdk6転写ファクトリーを網羅的に解析して骨代謝制御メカニズムを解明するために、(1)骨系統細胞の分化過程でCdk6転写ファクトリーを構成する転写因子・転写共役因子群(以下、Cdk6結合転写因子群)を網羅的に探索し、(2)骨系統細胞のゲノム上においてCdk6結合転写因子群が結合する部位を網羅的に探索し、(3)Cdk6結合転写因子群の細胞レベル・生体レベルでの機能を検討し、(4)それらの結果を利用した新規骨再生治療法開発のための基礎的検討を行う。平成24年度はCdk6ノックアウトマウス由来および同胞野生型マウス由来の骨芽細胞を用いて、Cdk6遺伝子欠損により変動する遺伝子群の解析を行った。我々のこれまでの研究成果に基づき、骨芽細胞培養開始3日と21日の時点でRNAサンプルを回収し、細胞分化・増殖に関与することが指摘されている遺伝子群の発現変動をリアルタイムRT-PCR法によって解析した。その結果、Cdk6遺伝子欠損により、特徴的な変動パターンを示す遺伝子を複数同定した。特に、その変動パターンが二双性であるなど興味深い変動パターンを呈した遺伝子については発現ベクターの調整に着手し、細胞内機能解析の準備を進めている。今後は、より網羅的な解析を行うために同RNAサンプルをマイクロアレイに供する予定である。また、Cdk6結合転写因子群の網羅的探索を目的に、マウス由来骨芽細胞様細胞MC3T3-E1細胞を分化誘導する系を用いて、骨芽細胞内でCdk6と結合する分子を網羅的に探索するためにタンパクを抽出して免疫沈降を行い、コントロール群と分化刺激群との間でCdk6と結合しているタンパクの違いを比較検討中である。(705字)
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
次世代シークエンサーを用いた網羅的解析については現在サンプル調整段階で、まだ解析に進んでいないため。
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| 今後の研究の推進方策 |
網羅的解析が若干遅れてはいるものの、極端に問題となるような遅れではないため、若干のスピードアップを意識しながら当初の計画通りに研究を進める。
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| 次年度の研究費の使用計画 |
平成24年度分の直接経費に関して未使用分は、主に当初平成24年度に実施予定であった次世代シークエンサーを用いた網羅的解析のために使用する。
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