| 研究課題/領域番号 |
24390465
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| 研究種目 |
基盤研究(B)
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| 研究機関 | 新潟大学 |
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研究代表者 |
奥田 一博 新潟大学, 医歯学系, 准教授 (00169228)
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| 研究分担者 |
川瀬 知之 新潟大学, 医歯学系, 准教授 (90191999)
永田 昌毅 新潟大学, 医歯学総合病院, 講師 (10242439)
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| 研究期間 (年度) |
2012-04-01 – 2015-03-31
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| キーワード | 骨膜細胞 / 歯根膜細胞 / 共培養 / 骨組織再生 / 血管新生 |
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| 研究概要 |
骨膜片組織培養における幹細胞様未分化細胞の増幅については、幹細胞様培地を用いることで、細胞増殖とECMの蓄積亢進による多層化・肥厚化が顕著に促進された。このなかで、CDI46陽性の周皮細胞様細胞の占める比率が上昇することを明らかにした。これらの細胞は、in vitroでは骨芽細胞への分化誘導に対する応答性が低いが、ヌードマウスに移植すると異所性に骨様組織を形成した。細胞の濃縮(高密度化)は骨膜中の骨芽細胞層の形態的特徴からも必須なプロセスと理解されることから、これに続く効率的な分化誘導法の確立によって、骨原性の高い移植物に調製できる可能性が見えてきた。
また、骨膜シートの血管新生に及ぼす影響については、動物移植ならびに鶏卵漿尿膜(CAM)の実験系で検証中である。特に後者実験系では、骨膜シートによる血管誘導・新生が顕著であることが確認された。さらに、ヒト血管内皮細胞(HUVEC)との複合化を試みたが、明らかな協調作用はまだ確認されていない。
骨芽細胞へ分化誘導した骨膜シートはヌードマウス移植実験系で、血管新生と破骨細胞の誘導効果が顕著であることを発見したが、上記の実験結果や最近の論文から、移植前のin vitroでの分化誘導が中期的なスパンでの骨再生にとって有効かどうか見極めていく必要がある。
一方、歯根膜細胞入手の機会が1回しかなく、貴重なサンプルとして増幅し凍結保存した。共培養に先立って、骨膜シートの培養上清の影響を検討したところ、幹細胞様培地の培養上清が歯根膜細胞の増殖を有意に促進することを確認できた。現在、分画化のための基礎情報を得る目的から、表面抗原の解析を行ない、文献的資料と比較検討している。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
歯根膜細胞の入手の機会は予定を下回ったため、分画化を実施するところまで進展しなかった。しかし、骨膜細胞に関する実験計画は概ね実施できた。得られたデータは、次年度の研究計画の見直しに有効に活用できる。
また、幹細胞用培地で調製した骨膜シートに関する基礎的な研究成果は論文ならびに学会発表という形で情報発信することができた。
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| 今後の研究の推進方策 |
骨膜細胞と歯根膜細胞の共培養を実施する。この際、骨膜細胞をフィーダー細胞化することも検討する価値があると考えている。動物移植あるいはCAM実験では、細胞を近赤外蛍光色素でラベルして、経時的・非侵襲的トラッキングを行なうとともに、そのエンドボイントでの細胞の局在から、移植細胞が機能・挙動・運命を明らかにしたい。
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| 次年度の研究費の使用計画 |
試薬と実験動物を主体とする消耗品購入のための物品費と研究成果の発表ならびに最新情報収集のための学会出張のための旅費に使用する計画である。
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