| 研究課題/領域番号 |
24406013
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| 応募区分 | 海外学術 |
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| 研究機関 | 東海大学 |
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研究代表者 |
橘 裕司 東海大学, 医学部, 教授 (10147168)
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| 研究分担者 |
小林 正規 慶應義塾大学, 医学部, 講師 (70112688)
小見山 智義 東海大学, 医学部, 准教授 (60439685)
牧内 貴志 東海大学, 医学部, 助教 (80587709)
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| 研究期間 (年度) |
2012-04-01 – 2016-03-31
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| キーワード | 原虫 / 疫学 / 人獣共通感染症 / 遺伝子多様性 / Entamoeba nuttalli / ミャンマー / マカク |
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| 研究概要 |
本研究では、新たに発見した病原アメーバEntamoeba nuttalliについて、アジア各地における分布を明らかにするとともに、ゲノムの多様性を比較解析することを目的としている。今年度は、ミャンマーのTaung Kalat (TK) とPho Win Taung (PWT) の寺院に生息する野生アカゲザルについて糞便を採取し、各種Entamoebaの感染率をPCR法によって調べた。E. nuttalliは、それぞれの地域で49％と31％の検体が陽性であった。一方で、赤痢アメーバは全く検出されず、E. dispar はPWTのみで６%の検体から検出された。従って、これらのアカゲザルにみられる赤痢アメーバ様４核嚢子のほとんどは、E. nuttalliであることが明らかになった。細菌共棲培養によって、TKで６株、PWTで８株を分離し、このうちTKで分離した１株については完全無菌化に成功した。セリンリッチ蛋白質遺伝子の解析では、２つの地域で２タイプずつ、計４タイプが存在した。tRNA関連繰返し配列については６カ所の座位で解析を行ったところ、TK由来株でA-Lに２タイプが認められたのを除き、２つの地域で異なるタイプが１種類ずつ観察された。このことから、E. nuttalliの遺伝子型の違いは分離株の地理的分布の違いをよく反映しているものの、ミャンマー分離株の多型性は、ネパール分離株に比較して小さいと考えられた。
また、無菌培養しているE. nuttalli P19-061405株のゲノムについて、第３世代のシーケンサーであるPacBio RSを用いた解読を試みた。培養栄養型虫体から抽出したゲノムDNAから10 kb断片のライブラリーを作成し、リード長1 kb以上のリードから約2Gbの塩基配列データを取得した。現在、そのアセンブルを進めている。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
ミャンマーにおける調査は予定通り実施でき、新たな分離株を確立できた。遺伝子多型の解析は順調に進行している。また、標準株の全ゲノムシークエンス解析も進行している。
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| 今後の研究の推進方策 |
調査実施対象国を増やすとともに、これまでに調査していないマカク種も対象とする。より多様な分離株を確立するとともに、遺伝子多型の解析を進める。また、標準株の全ゲノムについても解析を推進する。その上で新たな分離株のゲノム解析を実施していく予定である。
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| 次年度の研究費の使用計画 |
年度内に請求されるゲノム解析の費用が少なかったことと研究補助者の雇用時間が当初の予定よりも少なかったため、次年度使用額が生じた。
調査旅費やゲノム解析費用などに充当する予定である。
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