| 研究課題/領域番号 |
24406021
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| 研究機関 | 北海道大学 |
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研究代表者 |
鈴木 定彦 北海道大学, 人獣共通感染症リサーチセンター, 教授 (90206540)
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| 研究分担者 |
中島 千絵 北海道大学, 人獣共通感染症リサーチセンター, 准教授 (60435964)
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| 研究期間 (年度) |
2012-04-01 – 2016-03-31
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| キーワード | 多剤耐性結核 / 超多剤耐性結核 / 遺伝子型別 |
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| 研究実績の概要 |
多剤および超多剤耐性結核の蔓延が予想されているにもかかわらずその調査が十分でないものと考えられるアジアの開発途上国のうちネパール、バングラデシュ、ミャンマー、並びにフィリピンを対象として、研究を進めた。平成26年度は、当該年度までにネパール、バングラデシュおよびミャンマーにおいて収集した多剤耐性結核菌由来DNAの一部を対象として、注射用2次抗結核剤およびニューキノロン剤耐性に係ることが報告されている16SリボゾームRNAおよびDNAジャイレースAサブユニットをコードする遺伝子上の変異をそれぞれ解析した。
方法としては、目的とする遺伝子断片をPCR法により増幅させた後、これを精製し、BigDye Terminator (version 3.1) cycle sequencing kitを用いて塩基配列を決定後に、注射用2次抗結核剤およびニューキノロン剤の標準株の当該遺伝子のそれを比較し、遺伝子変異の有無を確認した。
その結果、ネパール、バングラデシュおよびミャンマーにおいて、超多剤耐性結核菌になる前段階の16SリボゾームRNAもしくはDNAジャイレースAサブユニットをコードする遺伝子上の特定の部位に変異を有する菌株（プレ超多剤耐性結核菌と呼ぶ）の多剤耐性結核菌に占める割合は、それぞれ32.9、17.2、15.9％である事が判明した。何れの国においても特にDNAジャイレースAサブユニット上の遺伝子変異の率が高く、安易なニューキノロン剤の使用が、結核対策に重大な支障をもたらしている事が明らかになった。本結果を、当該国の共同研究者と共有し、プレ超多剤耐性結核菌の監視強化の必要性を説いた。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
当初は、多剤および超多剤耐性結核の菌株の遺伝子型別を用いた調査を計画し、研究グループが独自に開発したSPoligo Array法による遺伝子型の分析を期間内に終了した。しかしながら、平成26年度に実施した16SリボゾームRNAおよびDNAジャイレースAサブユニットをコードする遺伝子上の変異の解析により、プレ超多剤耐性結核菌の多剤耐性結核菌に占める割合が、非常に高い事が判明したことから、検体数を増やした注射用2次抗結核剤およびニューキノロン剤耐性関連遺伝子変異の解析と更に詳細な遺伝子型解析が必要と考えられた。
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| 今後の研究の推進方策 |
引き続き16SリボゾームRNAおよびDNAジャイレースAサブユニットをコードする遺伝子上の変異の解析を進め、平成26年度までにネパール、バングラデシュおよびミャンマーで収集した検体のうち、200程度の注射用2次抗結核剤およびニューキノロン剤耐性関連遺伝子変異ならびに遺伝子型の解析を終了する。また、更に詳細な遺伝子型解析を実施する。更に、平成27年度も検体収集を継続して、菌株バンクおよびDNAバンクを充実させる。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
平成26年度に実施した16SリボゾームRNAおよびDNAジャイレースAサブユニットをコードする遺伝子上の変異の解析により、プレ超多剤耐性結核菌の多剤耐性結核菌に占める割合が、非常に高い事が判明した。検体数を増やした注射用2次抗結核剤およびニューキノロン剤耐性関連遺伝子変異ならびに遺伝子型の解析を実施する必要が生じた。そのため、更に詳細な遺伝子解析が必要と考えられた。
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| 次年度使用額の使用計画 |
16SリボゾームRNAおよびDNAジャイレースAサブユニットをコードする遺伝子上の変異を解析する。更に詳細な遺伝子解析を実施する。
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