研究課題/領域番号 |
24500526
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研究機関 | 筑波大学 |
研究代表者 |
三好 浩稔 筑波大学, 医学医療系, 講師 (70292547)
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研究分担者 |
大川 敬子 筑波大学, 医学医療系, 講師 (30251052)
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研究期間 (年度) |
2012-04-01 – 2016-03-31
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キーワード | 造血幹細胞 / ストローマ細胞 / 胎仔肝臓細胞 / 固定 / 凍結保存 / 分化・増殖 / 三次元培養 / ティッシュ・エンジニアリング |
研究実績の概要 |
造血幹細胞移植やバイオ人工肝臓の開発に応用できるような培養技術を確立することを目的として、固定処理した三次元培養フィーダー細胞上で未分化細胞を培養する方法について検討した。本年度は、前年度に引き続き、マウス胎仔肝臓細胞の培養密度を変化させてフィーダー細胞上での共培養実験を行うことで、培養密度が胎仔肝臓細胞中の未分化な造血系細胞の増幅度に及ぼす影響について検討した。また、ヒト臍帯血中の造血幹・前駆細胞を増幅するための予備的検討も実施した。 実験では、多孔質担体内部で三次元培養したフィーダー細胞層をグルタールアルデヒドで固定処理し(三次元固定処理)、保存、洗浄後に、この担体に胎仔肝臓細胞を異なる密度で播種してフィーダー細胞層上で共培養した。なお、対照としては、フィーダー細胞を用いない培養に加えて、良好な結果が得られることが確かめられている三次元凍結保存処理を三次元固定処理の代わりに用いた培養も実施し、未分化な造血系細胞(CD34 陽性細胞(造血幹・前駆細胞)など)が2週間でどの程度増幅されるかを調べた。 高密度で胎仔肝臓細胞を播種して共培養を行った場合、三次元固定処理、三次元凍結保存処理のいずれの条件でも未分化な造血系細胞の増幅度に大きな違いは認められなかった。胎仔肝臓細胞の播種密度を下げると、フィーダー細胞を三次元凍結保存処理した場合は、未分化な造血系細胞の増幅度は大幅に増加したのに対して、三次元固定処理では低下した。この傾向は、フィーダー細胞を用いない場合と同様であったことから、フィーダー細胞が分泌する因子が増幅に影響している可能性が示唆された。 以上の結果に基づき、最も増幅に適していた三次元凍結保存処理したフィーダー細胞を用いて、ヒト臍帯血中の造血系細胞を増幅する実験を行ったところ、未分化な造血系細胞を約5倍に増幅することができた。
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