安定同位体標識法による膵癌新規抗癌剤耐性因子の解明と血中診断マーカーへの臨床応用

2014 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 24501338
• 研究機関: 千葉大学
• 研究代表者: 佐藤 守 千葉大学, 医学部附属病院, 寄附研究部門教員 (20401002)
• 研究分担者: 曽川 一幸 麻布大学, 生命・環境科学部, 講師 (50436440) ; 吉富 秀幸 千葉大学, 医学部附属病院, 講師 (60375631) ; 宮崎 勝 千葉大学, 医学(系)研究科(研究院), 教授 (70166156) ; 野村 文夫 千葉大学, 医学(系)研究科(研究院), 教授 (80164739)
• 研究期間 (年度): 2012-04-01 – 2015-03-31
• キーワード: プロテオミクス解析 / 抗癌剤耐性 / 膵臓癌 / 培養細胞 / 培養上清 / SILAC

研究実績の概要

膵癌は固形癌の中でも最も予後が悪く、その要因として術後の急速な再発と化学療法・放射線療法に対する抵抗性に因るところが大きい。そこで本研究では、Gemcitabine(GEM)耐性膵癌細胞株のプロテオーム解析を行い、①細胞成分から新規GEM耐性因子を同定・機能解析を行い、新しい治療標的分子として特に個別化治療への応用を目的とする。②培養上清から細胞が分泌・逸脱する診断マーカー候補の探索・同定を行い、患者血清で定量評価を行い、抗癌剤の各症例への有効性が評価できる診断薬・診断法の開発を目的として行った。
①の新規GEM耐性因子の探索で可溶化度の違いで分画を行った結果、2倍以上変化したタンパク質は118。また、細胞分画を行った結果、2倍以上変化したタンパク質は344であった。変化の大きかった40タンパク質についてはWBによる検証を行った結果、質量分析の結果と同様の結果を得ることができた。また、同様の解析を別の細胞株でも行い、２つの細胞株の比較で同様の変化をしていたタンパク質についてsiRNAを用いて発現を抑制した結果、GEMに対する感受性の増加(耐性の低下）が見られた。このタンパク質については今後の治療標的(阻害剤の標的）として有望だと考えている。
②の培養上清中の細胞から分泌・逸脱するタンパク質の同定を試みた。当初、安定同位体による標識があるためFBS中のタンパク質と区別して比較定量・同定が行えると考えていたが、実際にはFBS由来のタンパク質を除去する際のロス等で思うような結果が得られなかった。そこで、クリックケミストリー技術を用いて培養上清中に分泌・逸脱するタンパク質の濃縮を試みた。これによりFBS由来のタンパク質の影響を回避することができ、上清中で2倍以上変化するタンパク質を35個同定することができた。同様の解析を別の細胞株でも行った結果、2つの細胞株で共通して上清中に分泌されるタンパク質は1つであった。

研究成果

• [雑誌論文] Urinary albumin and transferrin as early diagnostic markers of chronic kidney disease. (2015)
  • 著者名/発表者名: Maeda H, Sogawa K, Sakaguchi K, Abe S, Sagizaka W, Mochizuki S, Horie W, Watanabe T, Shibata Y, Satoh M, Sanda A, Nomura F, Suzuki J.
  • 雑誌名: J Vet Med Sci. 巻: - ページ: -
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Haploinsufficiency of the c-myc transcriptional repressor FIR, as a dominant negative-alternative splicing model, promoted p53-dependent T-cell acute lymphoblastic leukemia progression by activating Notch1. (2015)
  • 著者名/発表者名: Matsushita K, Kitamura K, Rahmutulla B, Tanaka N, Ishige T, Satoh M, Hoshino T, Miyagi S, Mori T, Itoga S, Shimada H, Tomonaga T, Kito M, Nakajima-Takagi Y, Kubo S, Nakaseko C, Hatano M, Miki T, Matsuo M, Fukuyo M, Kaneda A, Iwama A, Nomura F.
  • 雑誌名: Oncotarget. 巻: 6 ページ: 5102-5117
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Serum cytokine and chemokine profiles in patients with chronic inflammatory demyelinating polyneuropathy. (2015)
  • 著者名/発表者名: Beppu M, Sawai S, Misawa S, Sogawa K, Mori M, Ishige T, Satoh M, Nomura F, Kuwabara S.
  • 雑誌名: J Neuroimmunol. 巻: 279 ページ: 7-10
  • DOI: 10.1016
  • 査読あり
• [雑誌論文] Increased cell proliferation and differential protein expression induced by low-level Er:YAG laser irradiation in human gingival fibroblasts: proteomic analysis. (2014)
  • 著者名/発表者名: Ogita M, Tsuchida S, Aoki A, Satoh M, Kado S, Sawabe M, Nanbara H, Kobayashi H, Takeuchi Y, Mizutani K, Sasaki Y, Nomura F, Izumi Y.
  • 雑誌名: Lasers Med Sci. 巻: - ページ: -
  • 査読あり
• [雑誌論文] Nuclear accumulation of annexin A2 contributes to chromosomal instability by coilin-mediated centromere damage. (2014)
  • 著者名/発表者名: Kazami T, Nie H, Satoh M, Kuga T, Matsushita K, Kawasaki N, Tomonaga T, Nomura F.
  • 雑誌名: Oncogene. 巻: - ページ: -
  • DOI: 10.1038
  • 査読あり
• [雑誌論文] How proteomic ApoE serotyping could impact Alzheimer's disease risk assessment: genetic testing by proteomics. (2014)
  • 著者名/発表者名: Nishimura M, Satoh M, Matsushita K, Nomura F.
  • 雑誌名: Expert Rev Proteomics. 巻: 11 ページ: 405-407
  • DOI: 10.1038
  • 査読あり
• [雑誌論文] Moesin is a possible target molecule for cytomegalovirus-related Guillain-Barré syndrome. (2014)
  • 著者名/発表者名: Sawai S, Satoh M, Mori M, Misawa S, Sogawa K, Kazami T, Ishibashi M, Beppu M, Shibuya K, Ishige T, Sekiguchi Y, Noda K, Sato K, Matsushita K, Kodera Y, Nomura F, Kuwabara S.
  • 雑誌名: Neurology. 巻: 83 ページ: 113-117
  • DOI: 10.1212
  • 査読あり
• [雑誌論文] Alternative splicing of FBP-interacting repressor coordinates c-Myc, P27Kip1/cyclinE and Ku86/XRCC5 expression as a molecular sensor for bleomycin-induced DNA damage pathway. (2014)
  • 著者名/発表者名: Rahmutulla B, Matsushita K, Satoh M, Seimiya M, Tsuchida S, Kubo S, Shimada H, Ohtsuka M, Miyazaki M, Nomura F.
  • 雑誌名: Oncotarget. 巻: 5 ページ: 2404-2417
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Direct application of MALDI-TOF mass spectrometry to cerebrospinal fluid for rapid pathogen identification in a patient with bacterial meningitis. (2014)
  • 著者名/発表者名: Segawa S, Sawai S, Murata S, Nishimura M, Beppu M, Sogawa K, Watanabe M, Satoh M, Matsutani T, Kobayashi M, Iwadate Y, Kuwabara S, Saeki N, Nomura F.
  • 雑誌名: Clin Chim Acta. 巻: 435 ページ: 59-61
  • DOI: 10.1016
  • 査読あり
• [学会発表] 質量分析の基礎知識 (2015)
  • 著者名/発表者名: 佐藤守
  • 学会等名: 平成26 年度 高度先端的医学セミナー 質量分析に関する研修会
  • 発表場所: 東京都 日本臨床検査技師会館
  • 年月日: 2015-03-14 – 2015-03-15
  • 招待講演
• [学会発表] DAPTAD誘導体化を用いたLC-MS/MSによる血清ビタミンD代謝物の４項目同時定量 (2014)
  • 著者名/発表者名: 佐藤守、石毛崇之、小川祥二郎、西村基、松下一之、東達也、野村文夫
  • 学会等名: 第39 回 日本医用マススペクトル学会年会
  • 発表場所: 千葉県 三井ガーデンホテル千葉
  • 年月日: 2014-10-16 – 2014-10-17
• [学会発表] イムノアフィニティー抽出DAPTAD誘導体化LC-MS/MSによる血清25OH-ビタミンDおよび1,25（OH）2-ビタミン Dの同時定量 (2014)
  • 著者名/発表者名: 石毛崇之、佐藤守、小川祥二郎、西村基、土田祥央、澤井摂、松下一之、東達也、野村文夫
  • 学会等名: 第39 回 日本医用マススペクトル学会年会
  • 発表場所: 千葉県 三井ガーデンホテル千葉
  • 年月日: 2014-10-16 – 2014-10-17
• [学会発表] 前田浩人、前川武大、柴田悠衣、阿部沙織、堀江和香、望月俊輔、渡辺俊文、佐藤守、三田明弘、野村文夫、曽川一幸 (2014)
  • 著者名/発表者名: ネコ慢性腎不全における尿を用いた早期診断マーカーの探索
  • 学会等名: 第39 回 日本医用マススペクトル学会年会
  • 発表場所: 千葉県 三井ガーデンホテル千葉
  • 年月日: 2014-10-16 – 2014-10-17
• [学会発表] キウイフルーツアレルギーにおけるアレルゲンタンパク質の解析 (2014)
  • 著者名/発表者名: 河原彩花、曽川一幸、佐藤守、三田明弘、下条直樹、野村文夫
  • 学会等名: 第39 回 日本医用マススペクトル学会年会
  • 発表場所: 千葉県 三井ガーデンホテル千葉
  • 年月日: 2014-10-16 – 2014-10-17
• [学会発表] ナッツアレルギーにおけるアレルゲンタンパク質の解析 (2014)
  • 著者名/発表者名: 安東圭奈美、曽川一幸、佐藤守、三田明弘、下条直樹、野村文夫
  • 学会等名: 第39 回 日本医用マススペクトル学会年会
  • 発表場所: 千葉県 三井ガーデンホテル千葉
  • 年月日: 2014-10-16 – 2014-10-17
• [学会発表] プロテオーム解析を用いた歯周病疾患マーカー探索 (2014)
  • 著者名/発表者名: 土田祥央、佐藤守、曽川一幸、川島祐介、石毛崇之､別府美奈子､澤井摂、西村基、小寺義男、松下一之、野村文夫
  • 学会等名: 第39 回 日本医用マススペクトル学会年会
  • 発表場所: 千葉県 三井ガーデンホテル千葉
  • 年月日: 2014-10-16 – 2014-10-17
• [学会発表] 質量分析計を活用したがん培養細胞の分泌物解析とサイトケラチン断片の探索 (2014)
  • 著者名/発表者名: 陳健嘉、西村基、西村里美、石毛崇之、佐藤守、松下一之、野村文夫
  • 学会等名: 第39 回 日本医用マススペクトル学会年会
  • 発表場所: 千葉県 三井ガーデンホテル千葉
  • 年月日: 2014-10-16 – 2014-10-17
• [学会発表] MALDI-TOF MSを用いた細菌性髄膜炎の起因菌迅速同定 (2014)
  • 著者名/発表者名: 別府美奈子、澤井摂、瀬川俊介、村田正太、曽川一幸、渡邊正治、西村基、佐藤守、松下一之、野村文夫
  • 学会等名: 第39 回 日本医用マススペクトル学会年会
  • 発表場所: 千葉県 三井ガーデンホテル千葉
  • 年月日: 2014-10-16 – 2014-10-17
• [学会発表] Interactions between SF3b1(SAP155) and FUSE-binding protein-interacting repressor (FIR) links c-Myc and P27Kip1 expression through GeLC-MS analysis (2014)
  • 著者名/発表者名: 松下一之、佐藤守、朝長毅、野村文夫
  • 学会等名: 日本プロテオーム学会2014年会
  • 発表場所: 茨城県 つくば国際会議場
  • 年月日: 2014-07-17 – 2014-07-18