研究課題
ダイオキシンが哺乳動物に示す様々な毒性機構は、我々人類の環境汚染問題を改善していく上で、重要な研究領域であるにもかかわらず研究が進んでいない。毒性機構の中で、中心的な役割を果たすダイオキシン受容体（AhR）は、転写因子である。しかしながら、AhRの作用によって誘導発現する遺伝子CYP1A1の、転写開始近傍に結合する基本転写因子Sp1と、AhRとの関係は明らかになっていなかった。AhRがダイオキシンと結合することにより、CYP1A1遺伝子のエンハンサー領域に結合する前後で、転写開始点近傍のSp1結合部位におけるSp1の結合量には変化がないことが明らかとなった。そこで、エピジェネティックな調節機構のひとつである、Sp1のリン酸化状態を調べると、転写誘導が起こる前はSp1がリン酸化されていたが、転写誘導後にはSp1の５９番目Serが脱リン酸化されていることが明らかになった。また、CREM遺伝子の発現時に、脱リン酸化に関与するホスファターゼPP2Aが働くことが報告されていたので（Juang, et al. 2011）、PP2A阻害剤であるオカダ酸で前処理を行うと、CYP1A1の発現が抑制された。そこで、転写開始の前後でSp1-Ser59が細胞内で脱リン酸化されていることを示すために、リン酸化Sp1-Ser59を特異的に認識できる抗体を用いて、クロマチン免疫沈降反応（ChIP assay）法を行った。この方法により、ヒトHepG2細胞内において、ダイオキシン処理によるCYP1A1の転写誘導の前後では、Sp1-Ser59のリン酸化が減少していることが明らかとなった。また、PP2Aをノックダウンすることにより、阻害剤の場合と同様に、CYP1A1転写の開始時にSp1-Ser59の脱リン酸化が関与していることを示す結果が得られた。
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Ultrasonics
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