• 研究課題をさがす
  • 研究者をさがす
  • KAKENの使い方
  1. 課題ページに戻る

2013 年度 実施状況報告書

ラボディスクによるハイスループット単一細胞遺伝子発現解析

研究課題

研究課題/領域番号 24510171
研究機関創価大学

研究代表者

久保 いづみ  創価大学, 工学部, 教授 (40214986)

キーワード単一細胞 / 発現遺伝子解析 / Jurkat Cell / ラボディスク / Hot Cell-direct RT-PCR
研究概要

2013年度は2012年度に引き続き、Jurkat cellで発現しているハウスキーピング遺伝子GAPDHと非ハウスキーピング遺伝子(CD95, IL-2、p65)の発現量の違いを、βアクチン遺伝子で標準化しての比較を行った。発現量の指標である蛍光強度比のばらつきは、βアクチンで標準化後には、相対標準偏差がGAPDHで8%、非ハウスキーキーキーピング遺伝子では20%前後となり、非ハウスキーピング遺伝子での細胞ごとの発現量の違いが大きいことが示された。
さらに2013年度は、IL-2の発現量を上昇させるといわれるPMAを用いて、細胞毎の発現量の影響を評価した。PMAは終濃度0.2および2 μg/mlになるように細胞培養液に添加し、negative controlとしてPMAを加えずに、2時間培養した細胞を用いてHot Cell-direct RT-PCRによりIL-2の発現量を比較した。リアルタイムPCRでの比較では、PMAによるIL-2発現量の上昇が確認された。Jurkat cellをラボディスクを用いて細胞単離し、単一細胞を含むチャンバーについて比較したところ、PMA非添加と2 μg/mlの添加については、蛍光強度比2倍を超える細胞も1つ存在していたが、PMA非添加では蛍光強度比の範囲は1.05-1.34、2 μ/mlの添加では0.93-1.38と大きな差は見られなかった。0.2 μg/mlの添加では1.13-1.79と蛍光強度比の差が見られた。
一方、これまでの研究で、TAMRAプローブを用いたβ-actinの検出において、ラボディスクでの細胞単離後、細胞を含むチャンバーの蛍光強度がFAMに比べて低い結果が確認された。濃度条件について検討したところ、各プライマーの終濃度0.2 μM、FAMプローブの終濃度0.2 μM、TAMRAプローブの終濃度0.4 μMの条件においてβ-actinの相対蛍光強度比の平均が増加していることが確認された。

現在までの達成度 (区分)
現在までの達成度 (区分)

2: おおむね順調に進展している

理由

同一条件で培養した、同一株の細胞であっても、ラボディスクでの細胞単離後に発現遺伝子検出を行うと、細胞毎に遺伝子の発現量の違いを示唆する結果は得られており、その点からは順調に進展していると言える。

今後の研究の推進方策

培養条件の違いにより発現量が変化する遺伝子については、Jurkat Cellでの検討では、現在、有意に変化する遺伝子を確認できていない。他の遺伝子や、条件、あるいは他の細胞での検討を行う。

次年度の研究費の使用計画

一部消耗品の使用量が、当初予定量よりやや少なかったことによる。
おおきな使用計画の変更はない。

  • 研究成果

    (8件)

すべて 2014 2013 その他

すべて 雑誌論文 (2件) (うち査読あり 2件、 謝辞記載あり 1件) 学会発表 (6件)

  • [雑誌論文] Fluorescence Sensing of the Interaction between Biomembranes with Different Lipid Composition and Endocrine Disrupting Chemicals2014

    • 著者名/発表者名
      Y. Nakane and I. Kubo
    • 雑誌名

      Materials

      巻: 7 ページ: 170-179

    • DOI

      doi:10.3390/ma7010170

    • 査読あり / 謝辞記載あり
  • [雑誌論文] Peroxidase Activity of G-Quadruplex Hemin-Binding DNA Aptamers Determined by Electrochemical Measuremen2013

    • 著者名/発表者名
      I. Kubo, T. Eguchi, Y. Hoshino, M. Liu, H. Abe and Y. Ito
    • 雑誌名

      ECS Transactions

      巻: 50 (28) ページ: 1-7

    • DOI

      10.1149/05028.0001

    • 査読あり
  • [学会発表] 細胞単離ディスクを用いた単一細胞の発現遺伝子の評価

    • 著者名/発表者名
      聖前 直樹,古谷 俊介,青山 由利,久保 いづみ,
    • 学会等名
      第7回 バイオ関連化学シンポジウム
    • 発表場所
      名古屋
  • [学会発表] 細胞単離ディスク中でのPCRによる食肉中のサルモネラ菌の迅速検出

    • 著者名/発表者名
      鍜治屋 光俊,古谷 俊介,聖前 直樹,永井 秀典,久保 いづみ
    • 学会等名
      第34回食品微生物学会
    • 発表場所
      東京
  • [学会発表] Analysis of gene expression using a microfluidic disc for single cell isolation, Bio4Apps2013 Conference

    • 著者名/発表者名
      Naoki Shozen, Shunsuke Furutani, Yuri Aoyama, and Izumi Kubo
    • 学会等名
      Bio4Apps2013
    • 発表場所
      Tokyo
  • [学会発表] Hot cell-direct PCR of isolated single cells on a microfluidic device for genomic quantification

    • 著者名/発表者名
      Izumi Kubo, Naoki Shozen, Shunsuke Furutani
    • 学会等名
      Bio4Apps2013
    • 発表場所
      Tokyo
  • [学会発表] Gene Detection and Sensing System in Isolated Single Cells on a Microfluidic Device

    • 著者名/発表者名
      Izumi Kubo, Shunsuke Furutani, Naoki Shozen
    • 学会等名
      The 10th Asian Conference on Chemical Sensors
    • 発表場所
      Chiang Mai (Thailand)
  • [学会発表] Detection of Expressed Genes in Single Jurkat Cells by Hot Cell-direct RT PCR

    • 著者名/発表者名
      Naoki Shozen, Shunsuke Furutani, Yuri Aoyama, and Izumi Kubo
    • 学会等名
      The 10th Asian Conference on Chemical Sensors
    • 発表場所
      Chiang Mai (Thailand)

URL: 

公開日: 2015-05-28  

サービス概要 検索マニュアル よくある質問 お知らせ 利用規程 科研費による研究の帰属

Powered by NII kakenhi