| 研究課題/領域番号 |
24510301
|
|---|
| 研究機関 | 九州工業大学 |
|---|
研究代表者 |
坂本 寛 九州工業大学, 大学院情報工学研究院, 教授 (70309748)
|
|---|
| 研究分担者 |
安永 卓生 九州工業大学, 大学院情報工学研究院, 教授 (60251394)
小松 英幸 九州工業大学, 大学院情報工学研究院, 助教 (90253567)
|
|---|
| 研究期間 (年度) |
2012-04-01 – 2015-03-31
|
| キーワード | ヘム / ヘムオキシゲナーゼ / シトクロムP450還元酵素 / 蛋白質間相互作用 |
|---|
| 研究実績の概要 |
１．HO-2とシトクロムP450還元酵素（CPR）との表面プラズモン共鳴（SPR）による相互作用解析：HO-2に特徴的なN端延長配列ペプチドを化学合成し，HO-2とCPRとの結合に対する阻害実験を行ったところ，濃度依存的にHO-2のCPRに対する結合を阻害した。このことから，HO-2がヘムと結合していないapo状態でもCPRと弱いながら親和性を示す原因として，この酸性残基に富む延長配列部分がCPR分子表面の塩基性クラスター部分と静電的に相互作用していることが示唆された。
２．平衡沈降法を用いたHOとCPRとの相互作用解析：CPRにはopen型とclosed型の二種類のconformationがあり、CPRのヒンジ領域の一部を切除するとopen型が安定化される。このopen型を安定化した変異CPR (ΔTGEE)は、ヘム－HO-1複合体に安定に結合し、ΔTGEE－ヘム－HO-1複合体の結晶構造解析もなされている。一方， CPR分子内にジスルフィド結合を強制的に形成させた変異CPR (147CC514)は安定にclosed型として存在することが知られている。そこで，分析用超遠心機を用いてヘム-HO-1複合体とΔTGEEおよび147CC514との相互作用を検討したところ，ΔTGEEはヘム-HO-1複合体とサブマイクロM程度の解離定数で複合体を形成するのに対し，147CC514では複合体形成は見られなかった。
|
