研究課題
テトラヒメナ（Tetrarhymena pyriformis）には単量体のAK（AK1）と2ドメイン型のAK（AK2）の両方が存在しており，AK1は主に繊毛に，AK2は細胞質に局在することが分かっている．両者は繊毛内において，「アルギニンリン酸シャトル機構」に深く関わり，繊毛運動のエネルギー供給に深く関与している．また， AK1は，N末端にミリストイル化シグナル配列を持ち，そのN末端ペプチドがN-ミリストイルトランスフェラーゼによって実際にミリストイル化されることから，生体内においても修飾されている可能性が高い．より直接的にAK１のミリストイル化を証明するために，昆虫細胞由来の無細胞タンパク質合成系（島津製作所）を用いて，ミリストイル化されたAK1を直接合成した．先ず，C末にStrepタグを付加したAK1のcDNA配列を全合成した．次に，そのmRNAを大量に合成し，ミリストイルCoAを含む無細胞系に加えた．この系で合成されたAK1は，付加されたStrepタグを用いて純度よく精製することができた．さらに，SDS電気泳動を行い，合成されたAK1を切り出してMALDI-TOF-MS分析（トリプシン消化産物の質量分析）を外注した．比較のために，Tetrahymena AK1と同様にミリストイル化シグナル配列を持つ２種類のフォスファゲンキナーゼを合成し，併せて質量分析を行った．その結果，後者の２種類については，ミリストイル化されたN末端トリプシンペプチドの質量が0.1 Da以下の誤差で検出された．しかしながら，Tetrahymena AK1については，上記に相当する質量は観測されなかった． Tetrahymena AK1のペプチド質量の回収率が低かったことを考え合わせると，これはターゲットのペプチドがイオン化されなかった可能性を示唆する．今後条件を変えた分析が必要である．
すべて 2014
すべて 雑誌論文 (2件) (うち査読あり 2件、 謝辞記載あり 2件) 学会発表 (3件)
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