クラスリン依存性小胞輸送の制御機構解明―ノックアウトマウスの利用―

2014 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 24570159
• 研究機関: 奈良女子大学
• 研究代表者: 渡邊 利雄 奈良女子大学, 自然科学系, 教授 (60201208)
• 研究期間 (年度): 2012-04-01 – 2015-03-31
• キーワード: 小胞輸送 / Arf1 / CALM / SMAP1 / SMAP2 / CALM-AF10 / 核外排出配列NES / アルツハイマー症

研究実績の概要

自作したノックアウトマウスを用いてArf1, CALM, SMAPの詳しい解析を行い、『真のクラスリン依存性の細胞内小胞輸送の姿』を提示することを目指し、当該年度は以下の研究を実施した。
＜ノックアウトマウスの解析＞　Arf1 KOの E3.5胚の培養での異常の有無を検討した結果を原著論文として公表した。Arf1conditional マウスの樹立を確認し、全身性に誘導した欠損胚がArf1 KO胚と同様に胎生致死であることを確認した。CALM KOマウスを用いて、CALM欠損胚と誕生直後の個体の解析から目の色の薄さを発見し、メラニンの蓄積にCALMが関与している可能性を見出した。SMAP1,SMAP2二重が胚性致死である原因を探り、E7.5日胚でアポトーシスが起きていることを発見した。
＜細胞レベルでの解析＞　Arf1conditional 欠損E12.5日胚からMEF細胞株を樹立した。CALM欠損MEF細胞を用いて、CALMが関与するエンドソームとTGN間でのCALM欠損の効果の解析を行い、取り込まれたチロシンキナーゼ型受容体の分解が阻害されていることを明らかにし原著論文として公表した。SMAP1(-/-)：SMAP2(-/-)MEF細胞では、KD実験から予想されたトレンスフェリンの取り込み低下が全く見られないことを発見した。
＜白血病キメラ遺伝子CALM-AF10の解析＞　CALM KO　MEF細胞を用いて、遺伝子導入実験を行い、野生型のCALMにはレスキュー能が見られるのに、CALM-AF10, CALM-deltaNESとにはレスキュー能が見られないことを発見した。

研究成果

• [雑誌論文] Abrogation of protein phosphatase 6 promotes skin carcinogenesis induced by DMBA (2015)
  • 著者名/発表者名: Hayashi K, Momoi Y , Tanuma N, Kishimoto A, Ogoh H, Kato H, Suzuki M, Sakamoto Y, Inoue Y, Nomura M, Kiyonari H, Sakayori M, Fukamachi K, Kakugawa Y, Yamashita Y, Ito S, Sato I, Suzuki A, Nishio M, Suganuma M, Watanabe T, and Shima H
  • 雑誌名: Oncogene 巻: 印刷中 ページ: 印刷中
  • DOI: 10.1038/onc.2014.398
  • 査読あり / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] Clathrin assembly protein CALM Plays a Critical Role in KIT Signaling by Regulating Its Cellular Transport from Early to Late Endosomes in Hematopoietic Cells. (2014)
  • 著者名/発表者名: Shinya Rai, Hirokazu Tanaka*, Mai Suzuki , Honami Ogoh, Yasuhiro Taniguchi, Yasuyoshi Morita, Takahiro Shimada, Akira Tanimura, Keiko Matsui, Takafumi Yokota, Kenji Oritani, Kenji Tanabe, Toshio Watanabe, Yuzuru Kanakura, and Itaru Matsumura
  • 雑誌名: PLoS ONE 巻: 該当しない ページ: 0109441
  • DOI: 10.1371/journal.pone.0109441
  • 査読あり / オープンアクセス / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] The ADP-ribosylation factor 1 gene is indispensable for mouse embryonic development after implantation (2014)
  • 著者名/発表者名: Natsuki Hayakawa**, Honami Ogoh**, Mami Sumiyoshi**, Kananko Miyamoto, Yasuhisa Matsui, Saori Nishikawa, Yuko Maede, Hiroshi Kiyonari, Mai Suzuki, and Toshio Watanabe
  • 雑誌名: Biochem. Biophys. Res. Commun. 巻: 453 ページ: 748-753
  • 査読あり / 謝辞記載あり
• [学会発表] クラスリン集合タンパク質CALM欠損が及ぼすメラニン産生への影響。 (2015)
  • 著者名/発表者名: 大野絹代, 増田成美, 小河穂波,住吉麻実,早川夏姫, 稲垣綾華, 大塚瑞希, 中尾知美, 鈴木麻衣, 田中宏和, 森田詠子, 酒井良明, 渡邊利雄
  • 学会等名: 第62回 日本生化学会近畿支部例会
  • 発表場所: 草津、滋賀県
  • 年月日: 2015-05-16
• [学会発表] 融合遺伝子による白血病幹細胞の制御機構。 (2014)
  • 著者名/発表者名: 鈴木 麻衣、山形 和恒、齋藤 眞理子、渡邊 利雄、北林 一生
  • 学会等名: 第37回日本分子生物学会年会
  • 発表場所: 横浜
  • 年月日: 2014-11-27
  • 招待講演
• [学会発表] SMAP（Small Arf GAP）1,2両遺伝子欠損胚は致死でアポトーシスを起こしている。 (2014)
  • 著者名/発表者名: 住吉麻実、小河穂波、早川夏姫、鈴木麻衣、松居靖久、渡邊利雄
  • 学会等名: 第37回日本分子生物学会年会
  • 発表場所: 横浜
  • 年月日: 2014-11-25
• [学会発表] CALM-AF10の白血病誘導にはCALMが有する核外移行シグナルの機能が必須である。 (2014)
  • 著者名/発表者名: 鈴木 麻衣, 篠 実花, 相川 祐規子, 渡邊 利雄, 北林 一生
  • 学会等名: 第87回日本生化学会大会
  • 発表場所: 京都
  • 年月日: 2014-10-18
  • 招待講演
• [学会発表] 遺伝学的アルツハイマー病予防因子PICALM/CALMが病態形成に寄与する分子機構の解明。 (2014)
  • 著者名/発表者名: 金津 邦彦, 渡邊 利雄, 岩坪 威, 富田 泰輔
  • 学会等名: 第87回日本生化学会大会
  • 発表場所: 京都
  • 年月日: 2014-10-18
  • 招待講演
• [備考] 不明であった皮膚がんを抑え込む機構を解明
  • URL: http://www.nara-wu.ac.jp/news/H26news/20141209/20141209.html
• [備考] わかったぞ、皮膚がん抑制の仕組み
  • URL: http://scienceportal.jst.go.jp/news/newsflash_review/newsflash/2014/12/201 41215_04.html