| 研究課題/領域番号 |
24570201
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 研究機関 | 明治大学 |
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研究代表者 |
吉田 健一 明治大学, 農学部, 准教授 (20345036)
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| 研究期間 (年度) |
2012-04-01 – 2015-03-31
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| キーワード | マイクロＲＮＡ / エピジェネティクス |
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| 研究概要 |
本研究の目的は、申請者が見出した細胞周期関連マイクロＲＮＡの候補について、エピジェネティクスを中心とした発現制御機構の解明である。加えて、マイクロＲＮＡが標的とする新奇遺伝子の同定などを通して、エピ・マイクロＲＮＡおよびオンコ・マイクロＲＮＡであるか否か機能解析するこを目的とする。具体的には、マイクロＲＮＡ群の発現制御機構の理解に基づき、マイクロＲＮＡを過剰発現させる、あるいは発現抑制する結果、正常細胞やがん細胞株の増殖能などがいかに変化するのか解析する。これら諸課題の解決を通して、マイクロＲＮＡによる細胞機能制御の解明に貢献する。
エピジェネティクスがマイクロＲＮＡの発現制御にいかに関与しているか解明する目的で、5-aza-2’-deoxycytidineおよびトリコスタチンＡを種々のがん細胞株（Ａ５４９、ＨｅＬａ、Ｕ２ＯＳ）ならびに正常細胞株（ＴＩＧ１）に処理後、５種類のマイクロＲＮＡの発現レベルを定量的リアルタイム逆転写ＰＣＲ法で解析した。結果、miR-139-3pの発現は、5-aza-2’-deoxycytidine処理したＨｅＬａ細胞でのみ顕著に増強した。miR-139-3pの発現レベルは、5-aza-2’-deoxycytidineおよびトリコスタチンＡの共添加でさらに増強した。miR-139-3pを含むＰＤＥ２Ａ遺伝子の発現レベルも、同様の処理で増強した。現在、カリフォルニア大学（ＵＣＳＣ）のゲノム解析データベースを用い、ＰＤＥ２Ａ遺伝子内のＣｐＧアイランドを特定し、バイサルファイトシークエンシング法によりメチル化部位を特定すべく解析中である。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
特定の細胞株でエピジェネティカルな制御を受け得るマイクロＲＮＡを同定した。さらに、miR-139-3pについては、このマイクロＲＮＡ含むＰＤＥ２Ａ遺伝子のプロモーター領域近傍のＤＮＡ配列を特定し、バイサルファイトシークエンシング法によりメチル化部位を特定すべく解析中である。
加えて、miR-483-5pが標的とし得る新奇候補遺伝子として、ＭＡＰキナーゼ経路に位置する遺伝子を同定した。
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| 今後の研究の推進方策 |
miR-139-3pを含むＰＤＥ２Ａ遺伝子内に同定したＣｐＧアイランドについて、バイサルファイトシークエンシング法によりメチル化部位を詳細に特定する。加えて、miR-483-5pが標的とし得る新奇候補遺伝子について、特に細胞増殖制御機構に注目して解析を進める。
細胞周期を制御する転写因子Ｅ２Ｆファミリー、ＪＵＮおよびＲＡＳとマイクロＲＮＡ群との関係性について、特にフィードバック・ループの有無を解析する。
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| 次年度の研究費の使用計画 |
実験に必要な消耗品の購入費、成果発表のための旅費などに使用する予定である。
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