| 研究課題/領域番号 |
24570201
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| 研究機関 | 明治大学 |
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研究代表者 |
吉田 健一 明治大学, 農学部, 教授 (20345036)
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| キーワード | マイクロＲＮＡ |
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| 研究概要 |
本研究の目的は、細胞周期関連マイクロＲＮＡの候補としてmiR-139-3p、miR-483-5pおよびmiR-370を中心に、エピジェネティクスを中心とした発現制御の仕組みを解明することである。また、これらマイクロＲＮＡが発現を制御する遺伝子を同定することで、マイクロＲＮＡの細胞内機能の解明を目指す。これら諸課題の解決を通して、マイクロＲＮＡによる細胞周期制御機構の一端を解明することを目指す。
5-aza-2'-deoxycytidineによるＤＮＡ脱メチル化促進の結果、miR-139-3pの発現レベルはＨｅＬａ細胞においてのみ増強すると昨年度の研究実績で報告したが再現性を確認できず、実際にmiR-139-3pの発現レベルが回復するのはヒト肺癌由来細胞株Ａ５４９においてであることが判明した。miR-139-3pはＰＤＥ２Ａ遺伝子のイントロニック・マイクロＲＮＡであるのでＰＤＥ２Ａ遺伝子バリアント２および３のプロモーターと予測された領域内のＣｐＧアイランドおよびＣｐＧアイランドショアについてバイサルファイトシークエンシングによりＤＮＡメチル化解析を実施した。結果、Ａ５４９細胞におけるＤＮＡメチル化率はＣｐＧアイランドで低く、ＣｐＧアイランドショアでは高いことが判明した。miR-139-3pを安定的に発現する細胞株の樹立を目指して研究を続行中である。
miR-483-5pについては標的遺伝子としてＭＡＰキナーゼ経路のｐ４４が知られているが、本研究ではｐ４２も標的遺伝子である可能性を見出し、解析を実施中である。加えて、miR-370近傍の約２千塩基対の配列についてプロモーター活性およびＤＮＡメチル化の状態を解析中である。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
ＤＮＡ脱メチル化促進の結果、miR-139-3pの発現レベルが回復する細胞として、当初ＨｅＬａ細胞であるとしたが、その後の解析によりヒト肺癌由来細胞株Ａ５４９であることを明らかとした。その成果に基づき、miR-139-3pの発現を制御すると想定されるＰＤＥ２Ａ遺伝子バリアント２および３のプロモーター近傍についてバイサルファイトシークエンシング解析を実施し、ＤＮＡメチル化率はＣｐＧアイランドで低く、ＣｐＧアイランドショアでは高いことを明らかとした。さらに、miR-139-3pの細胞内機能を解析すべく、miR-139-3pを安定的に発現する細胞株の樹立を目指している。
miR-483-5pについては標的遺伝子の候補としてＭＡＰキナーゼ経路のｐ４２に注目している。現在miR-483-5pがｐ４４に加えｐ４２を標的とすることでいかなる細胞内機能を制御しているのか解明することを目指しているが、ｐ４２がmiR-483-5pの直接の標的なのか、あるいはmiR-483-5pにより間接的に発現制御されているのか明らかにできていない。
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| 今後の研究の推進方策 |
エピジェネティックな発現制御を受けるマイクロＲＮＡとしてmiR-139-3pに加え、miR-370についてもバイサルファイトシークエンシング解析を実施する。
miR-139-3pの細胞内機能を詳細に解析するため、miR-139-3pを安定的に発現する細胞株を樹立する。
miR-483-5pがｐ４２を直接の標的とするのか否か明らかにすることで、細胞周期制御因子とマイクロＲＮＡとのフィードバック制御の一端を明らかとする。
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