研究課題
エンドサイトーシスは細胞膜受容体、チャネル、トランスポーターなどの膜貫通型蛋白質の機能制御と品質管理、細胞外環境からの栄養物質の取り込み、神経伝達物質やホルモンの分泌に伴う細胞内膜小胞の補充など、多彩な生理現象に関与する。また、ウイルスやバクテリアなどの感染現象は、これらの病原体が宿主細胞に備わるエンドサイトーシス機構を巧妙にハイジャックする過程に他ならない。本研究の目的は、細胞増殖、免疫機構、細胞極性の形成など多様な生命現象において重要な役割を担うエンドサイトーシスの制御機構を分子レベルで明らかにすることである。この過程において最も重要かつ未解明の課題は、細胞膜を細胞質側に引き込み、湾曲させ、引き伸ばし、縊り取る、という非常にダイナミックな生体膜の変形機構の実体である。近年、このミッシングリンクを結ぶ因子として「生体膜の変形活性」を有する蛋白質群が見出され、エンドサイトーシスにおける重要性が多くの注目を集めている。本研究では、我々が近年見出した新規生体膜結合モジュール「SYLFドメイン」を有するタンパク質SH3YL1に着目して、エンドサイトーシスにおける細胞膜の形態変化を誘導するメカニズムを明らかにする。今年度は、SH3YL1の内在性タンパク質の生理的機能を明らかにするため、特異的抗体を用いた各種培養細胞株およびマウス臓器に対するウェスタンブロッティングを行った。その結果、いくつかの高発現細胞株を見出すことに成功した。これらの細胞株は特徴的なエンドサイトーシス経路を有することが考えられたため、機能的に関連する因子を同定することとした。タンデムアフィニティータグを持つ発現ベクターを用いた共沈アッセイ系を確立し、現在SH3YL1に対する相互作用因子を探索している。
2: おおむね順調に進展している
今年度の研究計画は概ね順調に進行することが出来た。SH3YL1の組織分布における新たな知見が得られたことから、本タンパク質の生理的機能に迫る足がかりが得られたと考えている。
前年度の成果をもとに一層の推進を予定している。新規相互作用因子の探索と同定に注力するための試薬類およびプロテオーム解析に研究費を有効に活用する予定である。
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