魚類ヘルパーＴ細胞亜集団の同定

2014 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 24580284
• 研究機関: 日本大学
• 研究代表者: 森友 忠昭 日本大学, 生物資源科学部, 教授 (20239677)
• 研究期間 (年度): 2012-04-01 – 2015-03-31
• キーワード: 魚類 / ヘルパーT細胞 / T細胞クローン株

研究実績の概要

哺乳類のヘルパーT 細胞（Th 細胞）は，発現される転写因子やサイトカインの産生パターンの違いにより，機能的に異なる「亜集団」に分類され，免疫応答を制御する重要な役割を果たしている．近年，魚類においても，哺乳類のTh1 細胞やTh2 細胞の転写因子およびサイトカインのホモログ遺伝子が同定され，魚類のT 細胞亜集団の存在が示唆されている．我々はコイのCD4＋T 細胞，すなわちTh 細胞が単クローン性に増殖できる培養系を独自に確立しているが，本研究では，T 細胞増殖因子であるコイIL-2 のリコンビナントタンパク質(rcIL-2)を用いてクローン作製の効率化を図った．
得られたT 細胞クローンを増殖させ継代を繰り返した結果，5 つのクローンにおいて安定的な継代培養が可能となった。これらクローン（Clone 1～5）の性状を解析したところ，TCR-α，TCR-β，CD4-1及びCD4-2 の遺伝子の発現は見られたが，CD8α 及びCD8β の発現は見られなかった．次に，Clone 1～5 をPHA で刺激し，Th1 関連サイトカイン遺伝子であるIFNγとTh2 関連サイトカイン遺伝子と考えられるIL-4/13A およびIL-4/13B の発現の変化を調べた．その結果，Clone 1ではIL4/13A およびIL-4/13B，Clone 2およびClone 3 ではIFNγ，さらに，Clone 5 ではIFNγrel の発現増強が認められた.Clone 4 ではどのサイトカイン遺伝子においても，他のクローンと比較して，発現の増強が見られなかった．
以上のことから，Clone 1はTh2 様のクローン，Clone 2 およびClone 3 はTh1 様のクローンであると考えられた．

研究成果

• [雑誌論文] Transcription analysis of two Eomesodermin genes in lymphocyte subsets of two teleost species. (2014)
  • 著者名/発表者名: Takizawa, F., Araki, K., Ohtani, M., Toda, H., Saito, Y., Lampe, V.S., Dijkstra, J.M., Ototake, M., Moritomo, T., and Nakanishi, T.
  • 雑誌名: Fish & shellfish immunology 巻: 36 ページ: 215-222
  • DOI: 10.1016/j.fsi.2013.11.004
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Peculiar monomeric interferon gammas, IFNγrel 1 and IFNγrel 2, in ginbuna crucian carp. (2014)
  • 著者名/発表者名: Shibasaki, Y., Yabu, T., Araki, K., Mano, N., Shiba, H., Moritomo, T., and Nakanishi, T.
  • 雑誌名: FEBS Journal 巻: 281 ページ: 1046-1056
  • DOI: 10.1111/febs.12666
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Identification of a novel fish granzyme involved in cell-mediated immunity. (2014)
  • 著者名/発表者名: Matsuura, Y., Yabu, T., Shiba, H., Moritomo, T., and Nakanishi, T.
  • 雑誌名: Developmental & Comparative Immunology 巻: 46 ページ: 499-507
  • DOI: 10.1016/j.dci.2014.06.006
  • 査読あり / オープンアクセス
• [備考] http://hp.brs.nihon-u.ac.jp/~vetfish/start.htm