カンピロバクターによる食鳥処理肉の汚染メカニズムの解明と制御技術の開発

2014 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 24580447
• 研究機関: 宮崎大学
• 研究代表者: 三澤 尚明 宮崎大学, 産業動物防疫リサーチセンター, 教授 (20229678)
• 研究期間 (年度): 2012-04-01 – 2015-03-31
• キーワード: カンピロバクター / ブロイラー / 食中毒 / 微生物制御 / 付着因子 / 食鳥処理 / HACCP

研究実績の概要

カンピロバクター食中毒は国内で最も発生件数の高い細菌性食中毒として重要視されており、その主要な感染源の一つに食鳥肉が挙げられる。しかしながら、食鳥と体表面への付着機序についてはほとんど明らかにされていない。そこで本研究では、鶏皮膚に対する本菌の付着因子を細菌側および食鳥側から明らかにすることを目的とした。
細菌側の付着因子を検索するため、Campylobacter jejuniの野生株(81-176)から遺伝子改変技術を用いて菌体表層に発現している鞭毛、莢膜、リン脂質およびPEB1外膜蛋白質の欠損株をそれぞれ作出し、鶏皮膚への付着菌数を定量的に測定した。その結果、莢膜が鶏皮膚への付着因子として重要な役割を担っていることが示唆された。しかしながら、接種菌数が高いと莢膜の有無に関わらず付着能の差は認められなかったことから、菌体には複数の付着因子が存在することが示唆された。
次に、食鳥側の付着因子を検索するため、皮膚のアルカリおよび酸処理が菌の付着に及ぼす影響を調べた。その結果、NaOHを用いた鶏皮膚の前処理によって、鶏皮膚に付着するC. jejuniの菌数が約1/10に減少した。一方塩酸処理では、未処理の場合と比較して付着菌数に有意差は認められなかった。よって皮膚のアルカリ処理抽出画分中にカンピロバクターの付着因子が含まれていると考え、アルカリ処理抽出画分をSDS-PAGE電気泳動した後にニトロセルロース膜に転写し、オーバーレイアッセイによる菌体蛋白画分との結合試験を行った。その結果、皮膚アルカリ処理抽出画分中の100～150kDa付近に結合するバンドが検出された。2次元電気泳動では、等電点が約6.85と8.31の2種類の蛋白が検出され、MALDI-TOF-MSを用いたペプチドマスフィンガープリント法によりタンパク質の同定を試みたが、鶏のタンパク質に関するデータベースが完備されていなかったため同定には至らなかった。

研究成果

• [雑誌論文] Identification of O serotypes, genotypes, and virulotypes of Shiga toxin-producing Escherichia coli isolates, including non-O157 from beef cattle in Japan. (2014)
  • 著者名/発表者名: Mekata H, Iguchi A, Kawano K, Kirino Y, Kobayashi I, Misawa N
  • 雑誌名: J Food Prot 巻: 77 ページ: 1269-1274
  • DOI: 10.4315/0362-028X.JFP-13-506.
  • 査読あり
• [雑誌論文] Comparative analysis of LTR and structural genes in an equine infectious anemia virus strain isolated from a feral horse in Japan. (2014)
  • 著者名/発表者名: Dong J, Cook FR, Haga T, Horii Y, Norimine J, Misawa N, Goto Y, Zhu W
  • 雑誌名: Arch Virol 巻: 159 ページ: 3413-3420
  • DOI: 10.1007/s00705-014-2206-0. Epub 2014 Aug 23.
  • 査読あり
• [雑誌論文] Molecular characterisation of a type III restriction-modification system in Campylobacter upsaliensis. (2014)
  • 著者名/発表者名: Nakajima T, Ono K, Tazumi A, Misawa N, Moore JE, Millar BC, Matsuda M
  • 雑誌名: Br J Biomed Sci 巻: 71 ページ: 66-72
  • 査読あり
• [雑誌論文] Intragenus generalized transduction in Staphylococcus spp. by a novel giant phage. (2014)
  • 著者名/発表者名: Uchiyama J, Takemura-Uchiyama I, Sakaguchi Y, Gamoh K, Kato S, Daibata M, Ujihara T, Misawa N, Matsuzaki S
  • 雑誌名: ISME J 巻: 8 ページ: 1949-1952
  • DOI: 10.1038/ismej.2014.29. Epub 2014 Mar 6.
  • 査読あり
• [雑誌論文] A PCR-RFLP assay for the detection and differentiation of Campylobacter jejuni, C. coli, C. fetus, C. hyointestinalis, C. lari, C. helveticus and C. upsaliensis. (2014)
  • 著者名/発表者名: Kamei K, Asakura M, Somroop S, Hatanaka N, Hinenoya A, Nagita A, Misawa N, Matsuda M, Nakagawa S, Yamasaki S
  • 雑誌名: J Med Microbiol 巻: 63 ページ: 659-666
  • DOI: 10.1099/jmm.0.071498-0. Epub 2014 Feb 25.
  • 査読あり
• [学会発表] 肉用鶏農場における鶏および鶏舎環境から分離されたカンピロバクターおよびサルモネラのMLST型別法による分子疫学的解析 (2015)
  • 著者名/発表者名: 山崎 渉、上村涼子、関口 敏、黒木真理子、吉野修司、三澤尚明
  • 学会等名: 平成26年度日本獣医師会獣医学術学会年次大会
  • 発表場所: 岡山市
  • 年月日: 2015-02-13 – 2015-02-15
• [学会発表] 肉用鶏農場における鶏および鶏舎環境から分離されたカンピロバクターおよびサルモネラのMLST型別法による分子疫学的解析 (2014)
  • 著者名/発表者名: 山崎 渉、上村涼子、関口 敏、Jianbao Dong、渡邉真治、桐野有美、目堅博久、谷口喬子、野中成晃、乗峰潤三、末吉益雄、後藤義孝、堀井洋一郎、黒木真理子、吉野修司、三澤直明
  • 学会等名: 第7回 日本カンピロバクター研究会
  • 発表場所: 東京都
  • 年月日: 2014-12-11 – 2014-12-12
• [学会発表] 鶏肉およびCampylobacter jejuniのPenner血清型とLOS合成関連遺伝子オペロンのタイピング (2014)
  • 著者名/発表者名: 谷口喬子、下田洋子、Khin Maung Latt、佐々木賢美、三澤尚明
  • 学会等名: 第7回 日本カンピロバクター研究会
  • 発表場所: 東京都
  • 年月日: 2014-12-11 – 2014-12-12
• [学会発表] 肉用鶏農場における鶏および鶏舎環境から分離されたカンピロバクターおよびサルモネラのMLST型別法による分子疫学的解析 (2014)
  • 著者名/発表者名: 山崎 渉、上村涼子、関口 敏、 Jianbao Dong、渡邉真治、桐野有美、目堅博久、谷口喬子、野中成晃、乗峰潤三、末吉益雄、後藤義孝、堀井洋一郎、黒木真理子、吉野修司、三澤尚明
  • 学会等名: 第63回九州地区獣医師大会
  • 発表場所: 鹿児島市
  • 年月日: 2014-10-04 – 2014-10-04
• [学会発表] エアサンプラを用いた鶏舎内浮遊微生物のモニタリング (2014)
  • 著者名/発表者名: 谷口喬子、上村涼子、佐々木淳子、佐々木賢美、山崎 渉、関口 敏、三澤尚明
  • 学会等名: 第63回九州地区獣医師大会
  • 発表場所: 鹿児島市
  • 年月日: 2014-10-04 – 2014-10-04
• [学会発表] 人獣由来Helicobacter cinaediの簡易迅速診断法および病態モデルの開発 (2014)
  • 著者名/発表者名: 谷口喬子、比嘉万理子、山崎 渉、佐伯裕二、岡山昭彦、林 哲也、三澤尚明
  • 学会等名: 第157回日本獣医学会学術集会
  • 発表場所: 札幌市
  • 年月日: 2014-09-09 – 2014-09-11
• [学会発表] 鶏における犬・猫・豚回虫感染検査法の検討 (2014)
  • 著者名/発表者名: 早田弥生、吉田彩子、丸山治彦、三澤尚明、堀井洋一郎、野中成晃
  • 学会等名: 第157回日本獣医学会学術集会
  • 発表場所: 札幌市
  • 年月日: 2014-09-09 – 2014-09-11
• [学会発表] The likelihood of insect transmission of BPV in an outbreak of teat papillomatosis in Holstein dairy cattle (2014)
  • 著者名/発表者名: 董 建宝、朱 偉、芳賀 猛、上松瑞穂、内田和幸、渡邊謙一、後藤義孝、乗峰潤三、谷口喬子、三澤尚明
  • 学会等名: 第157回日本獣医学会学術集会
  • 発表場所: 札幌市
  • 年月日: 2014-09-09 – 2014-09-11
• [学会発表] Initial detection for co-infection with bovine papular stomatitis virus and bovine papillomavirus in lingual papilloma-like lesion of cattle (2014)
  • 著者名/発表者名: 朱 偉、董 建宝、芳賀 猛、内田和幸、 渡邊謙一、乗峰潤三、三澤尚明、後藤義孝
  • 学会等名: 第157回日本獣医学会学術集会
  • 発表場所: 札幌市
  • 年月日: 2014-09-09 – 2014-09-11
• [学会発表] 肉用鶏農場における鶏および鶏舎環境から分離されたカンピロバクターおよびサルモネラのMLST型別法による分子疫学的解析 (2014)
  • 著者名/発表者名: 山崎 渉、上村涼子、関口 敏、 Jianbao Dong、渡邉真治、桐野有美、目堅博久、谷口喬子、野中成晃、乗峰潤三、末吉益雄、後藤義孝、堀井洋一郎、黒木真理子、吉野修司、三澤尚明
  • 学会等名: 第157回日本獣医学会学術集会
  • 発表場所: 札幌市
  • 年月日: 2014-09-09 – 2014-09-11
• [図書] 獣医公衆衛生学Ⅰ (2014)
  • 著者名/発表者名: 三澤尚明（分担執筆）
  • 総ページ数: 22
  • 出版者: 文永堂出版
• [図書] 獣医公衆衛生学Ⅱ (2014)
  • 著者名/発表者名: 三澤尚明（分担執筆）
  • 総ページ数: 2
  • 出版者: 文永堂出版