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真核細胞のリボソーム生合成において機能するシャペロン様AAA ATPase NVL2は、RNAヘリカーゼDOB1との相互作用を介してリボソーム前駆体に作用し、分子複合体の構造変換に寄与する。本研究では、NVL2の作用標的となるrRNA代謝複合体の構成成分を解明し、リボソーム生合成における役割を明らかにすることを目的とした。
最初の2年間では、DOB1を構成因子とするヒトTRAMP様複合体の同定と機能解析を行った。酵母において発見されたTRAMP複合体は、基質RNAの3’末端オリゴアデニル化を介してExosomeによるRNA分解を導く機能を有し、ポリ(A)ポリメラーゼTrf4/5、RNA結合タンパク質Air1/2、およびRNAヘリカーゼMtr4 (Dob1)から成る。しかし動物細胞では、DOB1以外には構成因子が明らかにされていなかった。そこで、Trf4/5およびAir1/2と弱い相同性を有するヒトcDNA ZCCHC7およびPAPD5に着目し機能解析を行った結果、それらの相互作用が示された。また機能面では、FISH法によるポリ(A) RNAの解析から、PAPD5の発現による核内ポリ(A)化RNAの蓄積が確認された。平成26年度では、ヒトTRAMP様複合体のrRNA代謝における役割を解析するため、(dT)17オリゴヌクレオチドをリバースプライマーとするRT-PCR法により、3’末端がポリアデニル化されたrRNA前駆体を特異的に増幅し検出するアッセイを実施した。その結果、低濃度のアクチノマイシンD添加によって生じる異常なrRNA前駆体断片が3’ポリアデニル化を受け、この反応にはPAPD5およびZCCHC7が必要であること、さらにその分解にDOB1が必要であることが確認された。これらの研究を通して、NVL2が相互作用するこれらの複合体が、リボソーム生合成過程におけるrRNA前駆体のポリ(A)化および分解/プロセシングに関与することが示された。
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