| 研究課題/領域番号 |
24590227
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| 研究機関 | 兵庫医療大学 |
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研究代表者 |
岩崎 剛 兵庫医療大学, 薬学部, 教授 (10151721)
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| 研究分担者 |
佐野 統 兵庫医科大学, 医学部, 教授 (00196304)
芝崎 誠司 兵庫医療大学, 共通教育センター, 准教授 (50342530)
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| 研究期間 (年度) |
2012-04-01 – 2015-03-31
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| キーワード | 肝細胞増殖因子（HGF） / 移植片対宿主病（GVHD） / 酵母（Yeast） / 分子ディスプレイ法 |
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| 研究実績の概要 |
HGFタンパクディスプレイ酵母の作製：提示すべきHGFタンパク遺伝子の5’末端に分泌シグナルをコードする遺伝子を、3’末端にαアグルチニン遺伝子と融合し、グリセルアルデヒド3-リン酸遺伝子のプロモーターの制御下で発現させるプラスミド遺伝子を構築した。プラスミドの導入により、HGFタンパク（α＋β鎖）およびHGFタンパク（α鎖）を細胞表面にディスプレイした酵母細胞を作製した。蛍光抗体染色により、細胞表層に十分量発現されていることが確認された。更に、最も発現量が高くなるよう時間を検討した後、経口投与用にHGF発現細胞のPBS懸濁液を調製した。
酵母細胞の経口投与：急性GVHDモデルは、10週齢の (DBA/2 x B6) F1マウスにB6マウス脾細胞を移入して作製した。実験群は１）コントロール酵母菌投与群、２）HGFタンパク（α＋β鎖）発現酵母菌投与群、３）HGFタンパク（α鎖）発現酵母菌投与群に分け、酵母菌の投与は、5 x 109/200μLをGVHD誘導後、Day 0-4、Day 7-11、Day 21-25に胃ゾンデを用いて経口投与した。その結果、HGFタンパク（α＋β鎖）発現酵母菌投与群のマウスは死亡までの期間が他のマウスとは大きく異なり、皮膚の炎症などGVHDの症状が現れるのも他より明らかに遅かった。HGFタンパク（α＋β鎖）発現酵母菌投与急性GVHDモデルマウスの腸管の病理組織学的解析を行った結果、腸管上皮細胞障害が抑制されていることが明らかになった。また、腸管、肝臓、脾臓における炎症性サイトカインの発現をRT-PCR法にて解析し、炎症性サイトカイン発現を解析した結果、これら炎症性サイトカインの発現が抑制されていた。
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