研究課題
基盤研究(C)
ゼブラフィッシュからクローニングし配列決定したPcdh10aについて、in situハイブリダイゼーションによる発現解析とドミナントネガティブ変異体による機能解析を行い、Pcdh10aが眼の発現に関わっていることが示された。in situハイブリダイゼーションでは、12hpfに頭側端と体幹外腹側に発現が始まり、18hpfには眼原基、終脳、間脳、視蓋、脊髄背側の近傍に、24hpfには水晶体、耳胞、終脳、間脳、中脳被蓋、視蓋尾側に発現した。水晶体での発現は36hpfを過ぎて減衰したが、耳胞では36hpfに最大となり42hpfを過ぎて減衰した。48hpfには脳に広くび漫性に発現し、以降減衰した。水晶体での発現を詳しく見ると、18hpfに体表外胚葉の水晶体領域にpcdh10aの発現が始まり、24hpfには最大となった。36hpf以降、水晶体の成熟とともに発現は減少し、42hpfには消失した。42hpfからは網膜と網膜色素上皮に発現し、48hpfから減衰し、72hpfには消失した。耳胞では、18hpfに耳胞上皮でpcdh10aの発現が始まり、72hpfまで続いた。42hpfからは膨大部稜に発現が強まった。24hpfから終脳と間脳に発現が現れ、42hpfには瀰漫的になった。中脳被蓋には24hpfから発現が見られ、36hpfに最大となり、42hpfでも続いていた。Pcdh10aの細胞内ドメインを欠くドミナントネガティブ変異体を作成して胚に強制発現させた。すると眼の形成異常が有意に多く見られた。体幹の異常も多く見られたが、発生初期にPcdh10aが発現することを反映するものと考えられた。
3: やや遅れている
Pcdh10aの発現解析と機能解析のデータ収集は終了し、論文を準備中である。一方詳細不明な他のプロトカドヘリンについては解析端緒のものもあり、その点やや遅れている。
前年度に引き続き、詳細不明な他のプロトカドヘリンについて探索と解析を進める。また、本件のPcdh10や田の研究によるPcdh15を含め、アイソフォームの違いにより発現パターンや機能に相違のあるプロトカドヘリンがあることがわかってきたので、それについて考察を深められるような解析を考えている。
昨年度冷凍機器を更新したが、今年度までの先送り分をもう一台更新する。その他は前年度に引き続き、試薬などの消耗品を中心として研究費を使用する。
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